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ROCK Inhibitor Y27632

  • 货号 : HZB391910
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ATCC ACS-3030

  • 规格 :
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 ROCK Inhibitor Y27632
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途 提高初级人类类器官的形成效率以及解冻和传代的恢复。提高人胚胎干细胞 (hESC) 和人诱导多能干细胞 (hiPSC) 的存活率并维持其多能性。1 细胞条件重编程 (CRC) 培养技术中的关键培养基成分。2
培养条件
培养基
使用方法 制备和储存 制备 10 mM 储备液 在无菌条件下将 3 mL 无菌水 (ATCC 60-2450) 或 D-PBS (ATCC 30-2200) 添加到 10 mg ROCK Inhibitor Y27632 小瓶中。通过移液充分混合。根据日常使用，按工作体积等分储备溶液。将等分试样储存在 -20°C 至 -80°C 下，并避免反复冷冻和解冻。解冻后，等分试样可在 2°C 至 8°C 下保存两周。 A. 类器官培养 以 10 µM 终浓度使用（每 mL 完全培养基含 1 µL 10 mM 库存溶液）。在解冻后的前 2-3 天和传代后的前 2-3 天补充培养基。根据需要将 ROCK Inhibitor Y-27632 直接添加到完整培养基中。补充后不要储存培养基。 B. 细胞条件重编程 (CRC) 培养物用作 F 培养基的成分。使用或不使用饲养细胞。使用终浓度为 10 µM（每 mL 完全培养基使用 1 µL 10 mM 库存溶液） C. 人类诱导多能干细胞 (iPSC) 培养 请参阅《ATCC 干细胞培养指南》了解更多信息。细胞培养基：多能干细胞 SFM XF/FF (ATCC ACS-3002) 建议用于无饲养层培养，iPSC 初始培养需要 ROCK 抑制剂 Y-27632。制备补充有 ROCK 抑制剂 Y-27632 的培养基 在冰上解冻 10 mM ROCK 抑制剂 Y-27632 储备溶液。在细胞培养基中以 1:1000 稀释 10 mM ROCK Inhibitor Y-27632，以获得 10 μM 的终浓度。例如，如果您准备 500 mL 培养基，添加 0.5 ml 10 mM ROCK 抑制剂 补充有 ROCK 抑制剂 Y-27632 的培养基必须立即使用。冷冻细胞的处理程序和处理细胞前 30 分钟开始培养 在添加至细胞之前，将适当的干细胞培养基在 37°C 下预热至少 30 分钟。从液氮储存中取出冷冻细胞的冷冻管。在 37°C 水浴中轻轻旋转以解冻细胞。为了减少污染的可能性，请将 O 形圈和盖子远离水。解冻应快速（大约 1 至 2 分钟）。当只剩下少量冰晶时，将冷冻管从水浴中取出。用 70% 乙醇冲洗对冷冻管进行灭菌。使用 1 mL 或 5 mL 移液器将细胞悬浮液轻轻转移至 15 mL 锥形管中。将 4 mL 干细胞培养基缓慢滴加到锥形管中，其中包括 10 μM ROCK 抑制剂 Y-27632 （ATCC ACS -3030）。使用额外的 1 mL 介质冲洗冷冻管并将液体转移到 15 mL 锥形管中。轻轻摇动锥形管以混合细胞，同时添加培养基。轻轻地上下吹打细胞 1-2 次以充分混合。避免将聚集物分解成单细胞悬浮液。将细胞以 200 xg 离心 5 分钟。吸出上清液并丢弃。轻轻敲击管底部以松开细胞沉淀。添加 1 mL 已补充 ROCK 抑制剂 Y27632 (ATCC ACS-3030) 的干细胞培养基，终浓度为 10 μM。用 1 mL 吸头上下吹打 1-2 次，轻轻重悬沉淀，保持细胞聚集体。根据需要在无饲养层培养条件下铺板细胞 ROCK 抑制剂 Y-27632 在随后的细胞培养基更换中不是必需的，并且传代细胞也不需要。注意：使用 ROCK 抑制剂可能会对 iPSC 造成短暂的纺锤样形态效应。然而，在不使用 ROCK 抑制剂的情况下进行后续培养基更换后，集落形态将恢复。参考文献 Li X. 等人，ROCK 抑制剂可提高冷冻保存的无血清/无饲养层的单个人胚胎干细胞的存活率。 Hum Reprod 24(3): 580-589, 2009. PubMed: 19056770 刘雪峰等。 ROCK 抑制剂和饲养细胞诱导上皮细胞的条件重编程。美国病理学杂志 180(2): 599-607, 2012。
传代方法
规格
保存说明 -20°C 或更低
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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