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Trypsin-EDTA Solution, 1X

  • 货号 : HZB391917
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ATCC 30-2101

  • 规格 : 100毫升
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Trypsin-EDTA Solution, 1X
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途 Hanks 平衡盐溶液中含有 0.25% 胰蛋白酶/0.53 mM EDTA，不含钙或镁。用于细胞单层的解离。胰蛋白酶-EDTA 溶液适用于大多数但不适用于所有贴壁细胞系。有关细胞系特定信息，请访问网络上相应的产品页面，参阅细胞系随附的产品表，或联系 ATCC 技术服务。
培养条件
培养基
使用方法 此过程中使用的量适用于 75 cm2 烧瓶。根据不同尺寸的容器调整体积。将 ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液调至适当的温度（参见细胞系产品表）。这可能是 4°C、室温或 37°C，具体取决于细胞类型。您可能还需要使用平衡盐溶液 [例如，ATCC® Dulbecco 不含 Ca 或 Mg 的磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，目录号 30-2200] 冲洗细胞。如果是这样，请将其达到相同的温度。最后，将新鲜、完整的细胞培养基带到适合细胞生长的温度（例如，37°C）。从烧瓶中取出并丢弃细胞培养基。根据细胞系，用 5 mL ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液或 ATCC® Dulbecco PBS（适用于更多胰蛋白酶敏感细胞）冲洗细胞单层并去除。添加 2 至 3 mL ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液，并在适当的温度（4°C、室温或 37°C）下孵育。通过显微镜持续检查细胞解离的进展。为了避免结块，在等待细胞分离时，请勿通过敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。一旦细胞出现分离（大多数细胞系需要 5 至 15 分钟，它们在显微镜下会呈圆形），向细胞悬浮液中添加 6 至 8 mL 完全生长培养基，并用移液器从底部清洗任何剩余的细胞烧瓶的。用显微镜检查细胞，确保大多数（> 95%）以单细胞形式存在。如果细胞簇明显，继续用移液器轻轻吹打以分散细胞（参见下面的故障排除）。将 12 至 15 mL 的新鲜细胞培养基添加到新烧瓶中，并将该培养基平衡至适当的 pH 和温度。收集细胞悬液，计数和/或分割，并将细胞分配到新准备的烧瓶中。有关推荐的传代比例，请参阅细胞系产品表。对于无血清或低血清培养基，通过温和离心（125 xg 5 分钟）去除 ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液，并将细胞重悬于新鲜培养基中。故障排除 细胞很难去除。解离剂太弱。尝试在更高的温度下孵育。培养基（例如血清）中的抑制剂使胰蛋白酶失活。在与 ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液一起孵育之前，更彻底地冲洗单层细胞。细胞处于汇合密度的时间太长，细胞与细胞之间的连接非常紧密，以至于阻止了酶到达底物-细胞界面。在细胞 100% 汇合之前进行传代培养。细胞解离后聚集成块。 DNA 已从裂解的细胞中释放出来，因为解离过程过于苛刻。将一滴无菌 DNAse（1 mg/ml 水溶液）添加到细胞悬浮液中。以后，在移液过程中更温和地处理细胞、缩短孵育时间和/或降低孵育温度。细胞在传代培养前重新聚集。如果从烧瓶中取出细胞与将其分散到新鲜细胞培养基之间存在延迟，请将细胞悬浮液置于冰上。细胞难以重新附着。解离酶可能已经从细胞表面剥离了必要的附着蛋白。更温和地处理细胞，减少使用 ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液，缩短孵育时间，和/或降低孵育温度。培养基中血清或附着因子不足（常见于无血清培养基）。添加附着因子或使用蛋白质包被板（胶原、聚赖氨酸、明胶等）。 ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液不会被细胞培养基（例如血清）灭活。添加特定的酶抑制剂或通过温和离心（125 × g 5 分钟）去除 ATCC® 胰蛋白酶-EDTA 溶液，然后更换培养基。
传代方法
规格 100毫升
保存说明 -20°C 或更低
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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