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Stem Cell Freezing Media

  • 货号 : HZB391908
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ATCC ACS-3020

  • 规格 : 20毫升
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Stem Cell Freezing Media
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途
培养条件
培养基
使用方法 A. 人类或小鼠原代组织衍生类器官的冷冻保存 我们建议每 1 mL 冷冻介质冷冻 100 – 200 µL 含有类器官的 ECM。例如，如果在 24 孔板的每孔 50 µL ECM 中培养类器官，则应将 2-4 个孔合并并冷冻在一个小瓶中。程序 收集类器官并通过机械分离从 ECM 中去除。在 DMEM:F12 (ATCC 30-2006) 中洗涤一次并以 500 xg 离心 5 分钟以沉淀。吸出上清液。在冷的干细胞冷冻培养基中重悬沉淀。立即将 1 mL 悬浮液转移至预先标记的冷冻管中。将冷冻管放入 ATCC CoolCell (ATCC ACS-6000) 冷冻容器中。将冷冻容器置于-80°C 24小时。从冷冻容器中取出小瓶并转移至液氮气相中以进行长期储存。 B. hESC 或 hiPSC 的冷冻保存 有关更多信息，请参阅 ATCC 干细胞培养指南。该方案设计用于冷冻保存在 6 cm 培养皿中培养的细胞，使用干细胞解离试剂 (ATCC ACS -3010) 将细胞集落从培养皿中分离出来。干细胞解离试剂以 0.5 U/mL 工作溶液形式储存在 DMEM：F 12 培养基 (ATCC 30 -2006) 中。干细胞培养基 多能干细胞 SFM XF/FF (ATCC ACS -3002) 建议用于无饲养层培养 为获得最佳结果，请在细胞培养物汇合度≤80% 时冷冻保存干细胞集落。推荐的解离方案 将干细胞解离试剂工作溶液的等分试样加热至室温。吸出并丢弃干细胞培养基。每 6 厘米培养皿用 5 mL 的 DMEM:F12 (ATCC 30-2006) 冲洗细胞一次。将 3 mL 干细胞解离试剂工作溶液添加到培养皿中。在 37°C 下孵育 10 至 15 分钟，或直至各个菌落的边缘开始松弛并向后折叠。从 5 分钟开始在显微镜下观察培养皿，因为孵育时间可能会根据细胞系和集落大小而变化。吸出干细胞解离试剂，并用 5 mL DMEM：F 12 培养基轻轻冲洗集落，注意操作过程中不要移动细胞。将 3 mL 干细胞培养基添加到培养皿中，并用 1 mL 吸头上下吹打 3-4l 次，分离细胞。注意不要将培养物过量移入单细胞悬浮液中，因为单细胞在接种后不会形成集落。将细胞聚集体转移至 15 mL 锥形管中。添加额外的 3 mL 干细胞培养基到培养皿中以收集任何剩余的细胞。将该冲洗液转移至含有细胞聚集体的 15 mL 锥形管中。将细胞聚集体以 200 xg 离心 5 分钟。吸出上清液并丢弃。轻轻敲击管底部以松开细胞沉淀。冷冻保存方案 按照推荐的解离方案中的描述，将干细胞集落从培养皿中分离出来。从储存中取出干细胞冷冻培养基并旋转混合。保持寒冷。用70%酒精浸泡或喷洒去污。将 2 mL 冷干细胞冷冻介质添加到含有细胞沉淀的管中。用 1 mL 吸头上下吹打 5-6 次，轻轻重悬沉淀，保持细胞聚集。立即将各 1 mL 细胞悬液转移至两个标记的冷冻管中。以-1°C/min的速度逐渐冷冻细胞，直至温度达到-70°C至-80°C。也可以使用冷冻容器（例如，CoolCell LX 无酒精冷冻保存容器（ATCC ACS-6000））。细胞不应在 -80°C 下放置超过 24 至 48 小时。一旦达到-80°C，冷冻冻存管应转移至液氮气相中以进行长期储存。冷冻细胞的处理程序和处理细胞前 30 分钟开始培养 - 将适当的干细胞培养基在 37°C 下预热至少 30 分钟，然后添加到细胞中。从液氮储存中取出冷冻细胞的冷冻管。在 37°C 水浴中轻轻旋转以解冻细胞。为了减少污染的可能性，请将 O 形圈和盖子远离水。解冻应快速（大约 1 至 2 分钟）。当只剩下少量冰晶时，将冷冻管从水浴中取出。用 70% 乙醇冲洗对冷冻管进行灭菌。使用 1 mL 或 5 mL 移液器将细胞悬浮液轻轻转移至 15 mL 锥形管中。向锥形管中缓慢滴加 4 mL 干细胞培养基。使用额外的 1 mL 介质冲洗冷冻管并将液体转移到 15 mL 锥形管中。轻轻摇动锥形管以混合细胞，同时添加培养基。轻轻地上下吹打细胞数次以充分混合。避免将聚集物分解成单细胞悬浮液。将细胞以 200 xg 离心 5 分钟。吸出上清液并丢弃。轻轻敲击管底部以松开细胞沉淀。添加 1 mL 已补充 ROCK 抑制剂 Y27632 （ATCC ACS-3030）的干细胞培养基，终浓度为 10 μM。用 1 mL 吸头上下吹打 5 至 6 次，轻轻重悬沉淀，保持细胞聚集体。根据需要在饲养层依赖性或无饲养层培养条件下铺板细胞。建议干细胞培养基中存在 10 µM ROCK 抑制剂 Y27632。
传代方法
规格 20毫升
保存说明 2°C 至 8°C
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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