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Stem Cell Dissociation Reagent

  • 货号 : HZB391913
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ATCC ACS-3010

  • 规格 :
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Stem Cell Dissociation Reagent
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途
培养条件
培养基
使用方法 与该产品相关的详细方案可在线获取 ATCC 干细胞培养指南。 0.5 U/mL 工作溶液的制备 冻干蛋白质往往具有吸湿性。打开前将干细胞解离试剂瓶恢复至室温。小瓶摸起来不应该是凉的。一旦打开，冻干材料应干燥保存。干细胞解离试剂的具体活性可在产品标签上找到。将干细胞解离试剂粉末溶解在适当体积的 DMEM：F-12 培养基 (ATCC 30-2006) 中，制备 0.5 U/mL 工作溶液。通过 0.22 µm 滤膜过滤灭菌溶液，并根据使用情况等分到工作体积中。取适量干细胞解离试剂溶解于 DMEM:F-12 培养基中，配制成 0.5 U/mL 工作液。示例：制备 40 mL 0.5 U/mL 工作溶液： 干细胞解离试剂的比活性（分析证书上）：1.46 U/mg [(40 mL)(0.5 U/mL)]/(1.46 U/ mL)= 13.7 mg 将 13.7 mg 干细胞解离试剂溶解在 40 mL DMEM：F-12 中。将等分试样在 -20°C 下保存最多三个月。避免反复冷冻和解冻。解冻后，等分试样可在 2°C 至 8°C 下保存最多两周。解离方案 该方案设计用于在 6 厘米培养皿中解离细胞。应根据要处理的组织培养容器的大小和数量调整体积。干细胞培养基：多能干细胞 SFM XF/FF (ATCC ACS-3002) 推荐用于无饲养层培养，多能干细胞 SFM XF (ATCC ACS-3001) 推荐用于饲养层依赖性培养（例如小鼠胚胎成纤维细胞） (MEF) 或人包皮成纤维细胞 (HFF)。在干细胞培养基中培养 hESC/hiPSC，直至细胞达到 80% 汇合。将干细胞解离试剂工作溶液等份加热至室温。吸出并丢弃干细胞培养基。用 4 mL 的 Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) (ATCC 30-2200) 冲洗（添加并吸出）细胞两次。向培养皿中添加 2 mL 干细胞解离试剂工作溶液。在 37°C 下孵育 10 至 15分钟或直到各个菌落开始松散并向后折叠。从 5 分钟开始在显微镜下观察培养皿，因为孵育时间可能会根据细胞系和菌落大小而变化。吸出干细胞解离试剂并轻轻冲洗（添加并吸出） ）用 4 mL DMEM：F-12 培养基进行集落，注意操作过程中不要移动细胞。将 2 mL 干细胞培养基添加到培养皿中，并通过用 1 mL 吸头上下移液几次来分离细胞。注意不要将培养物过度移入单细胞悬浮液中，因为单细胞在接种后不会形成集落。将细胞聚集体转移至 15 mL 锥形管中。添加额外的 4 mL 干细胞培养基到培养皿中以收集任何剩余的细胞。将该冲洗液转移至含有细胞聚集体的 15 mL 锥形管中。将细胞以 200 xg 离心 5 分钟。吸出上清液并丢弃。轻轻敲击管底部以松开细胞沉淀。对于每个处理的培养皿，在 10 µM ROCK 抑制剂 Y27632* (ATCC ACS-3030) 存在下将 2 mL 干细胞培养基添加到 15 mL 管中。注意：添加 ROCK 抑制剂已被证明可以提高人 iPSC 传代培养和解冻过程中的存活率。 ROCK抑制剂的使用可能会对细胞造成短暂的纺锤样形态效应。然而，在随后更换不含 ROCK 抑制剂的培养基后，集落形态将恢复。1 用 1 mL 吸头上下移液 2 至 3 次，轻轻重悬沉淀，保持小细胞聚集体。根据需要将细胞铺在饲养层或无饲养层培养物上。建议干细胞培养基中存在 10 µM ROCK 抑制剂 Y27632。参考文献 1. Li X. 等人，ROCK 抑制剂提高了冷冻保存的无血清/无饲养层的单个人胚胎干细胞的存活率。人类生殖，第 24 卷第 3 期，第 580-589 页，2009 PubMed 19056770
传代方法
规格
保存说明 2°C 至 8°C
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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