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Osteocyte Differentiation Tool

  • 货号 : HZB391905
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ATCC PCS-500-052

  • 规格 : 100毫升
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Osteocyte Differentiation Tool
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途 当以 18,000 个活细胞/cm2 的推荐密度铺板在 6 孔组织培养形式中时，骨细胞分化工具可提供足够的培养基来分化约 100 万个细胞。
培养条件
培养基
使用方法 不需要抗菌剂和酚红，但如果需要，可以在使用前将其添加到骨细胞分化工具中。表 1 总结了添加到骨细胞分化工具中的每种可选成分的推荐体积。 表 1. 每 100 ml 培养基可选添加抗菌剂/抗真菌剂和酚红 成分 体积 最终浓度 庆大霉素-两性霉素 B 溶液 0.1 mL 庆大霉素： 10 µg/mL 两性霉素 B：0.25 µg/mL 青霉素-链霉素-两性霉素 B 溶液 0.1 mL 青霉素：10 单位/mL 链霉素：10 µg/mL 两性霉素 B：25 ng/mL 酚红*** 0.1 mL 33 µM ** *请注意，使用酚红可能会增强和加速骨细胞分化过程中钙沉积的速度。准备用于骨细胞分化的细胞 按照脂肪源间充质干细胞 (ATCC PCS-500-011) 生长的说明进行操作。在开始骨细胞分化之前，细胞传代不要超过四 (4) 次。当细胞达到 70%-80% 汇合时，将其以 18,000 个活细胞/cm2 的密度传代到组织培养板中。根据所使用的组织培养板调整细胞数量和培养基体积。示例：对于表面积为 9.5 cm2/孔的 6 孔组织培养板，向每个含有 2 mL 间充质干细胞基础培养基 (ATCC® PCS-500-030) 的孔中添加总共 171,000 个活细胞，并补充间充质干细胞生长试剂盒 – 低血清 (ATCC® PCS-500-040) 组件。孵育前轻轻地来回摇晃培养板，使细胞均匀分布。不要旋转。在开始骨细胞分化之前，将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 48 小时。骨细胞分化程序 将制备的脂肪源间充质干细胞孵育 48 小时（如上所述）后，在水浴中将骨细胞分化工具预热至 37°C。将一瓶 D-PBS (ATCC 30-2200) 恢复至室温。从培养箱中取出准备好的脂肪源间充质干细胞，并小心地从每个孔中吸出培养基。向每个孔中轻轻添加 2 mL 室温 D-PBS (ATCC 30-2200)，然后从孔中吸出 PBS 冲洗液，同时小心不要干扰细胞，从而冲洗细胞。将 2 mL 预热的骨细胞分化工具添加到每个孔中。 （将剩余的骨细胞分化工具储存在黑暗中2°C-8°C以备后用）。在更新培养基之前，将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 3-4 天。准备好更新培养基时，从存储中取出骨细胞分化工具并将所需体积转移到无菌管中。 （对于完整的 6 孔板，该体积为 12 mL）。将转移的骨细胞分化工具等份在水浴中加热至 37°C。从每个含有细胞的孔中除去除 1 mL 之外的所有旧介质。重要提示：在此步骤或任何后续步骤中，请勿在抽吸过程中倾斜板或以其他方式将单层暴露于空气中。将 2 mL 新鲜的、预热的骨细胞分化工具轻轻移至孔的一侧，以免干扰单层或积累的钙晶体。 （这使得每个孔中的最终体积达到 3 mL）。注意：分化细胞的单层处于张力之下并且极其脆弱。细胞很容易从板上脱落，必须小心处理。每 3-4 天重复步骤 6 至 10，直到细胞接触骨细胞分化工具总共 19 天。根据实验设计，细胞可用于骨细胞分化的任何阶段。为了确认钙积累，可以固定细胞并用茜素红（未提供）染色。注意：如果观察到单层边缘卷曲，细胞将在 24-48 小时内从组织培养板上脱离，应立即使用。
传代方法
规格 100毫升
保存说明 -20°C 或更低
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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