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Chondrocyte Differentiation Tool

  • 货号 : HZB391903
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ATCC PCS-500-051

  • 规格 : 100毫升
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Chondrocyte Differentiation Tool
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途
培养条件
培养基
使用方法 不需要抗菌剂和酚红，但如果需要，可以在使用前将其添加到软骨细胞分化工具中。表 1 总结了软骨细胞分化工具中添加的每种可选成分的推荐体积。 表 1. 每 100 mL 培养基成分可选添加抗菌剂/抗真菌剂和酚红 体积 最终浓度 庆大霉素-两性霉素 B 溶液 0.1 mL 庆大霉素：10 µg/mL 两性霉素 B：0.25 µg/mL 青霉素-链霉素-两性霉素 B 溶液 0.1 mL 青霉素：10 单位/mL 链霉素：10 µg/mL 两性霉素 B：25 ng/mL 酚红 0.1 mL 33 µM 海藻酸盐封装所需的其他材料（未提供）： 海藻酸钠（例如 Sigma-Aldrich #71238） 3 mL 注射器 27 号针头 Steriflip® 过滤装置，Millipore Corporation（真空驱动 50 mL 过滤系统） 大口径移液器吸头 150 mM NaCl 溶液 100 mM CaCl2溶液（无菌） 小型磁力搅拌棒（无菌） 250 mL 烧杯（无菌） 镊子或搅拌棒提取器（无菌） 磁力搅拌板 软骨细胞分化 软骨细胞分化要求细胞在三维聚集细胞培养物中生长。可采用微团培养；但是，为了获得最佳结果，ATCC 建议使用基质（例如藻酸盐）来为蛋白聚糖的沉积提供支架。以下程序演示了使用 25 mL 软骨细胞分化工具和藻酸盐封装将约 2.7 x 107 个细胞接种到 48 孔组织培养板的四个孔中的分化。 1.5% (w/v) 海藻酸盐溶液的制备 将 0.15 g 海藻酸盐添加到 10 mL 150 mM NaCl 中，同时快速搅拌或涡旋以尽量减少结块。在室温下在摇床上搅拌溶液至少 2 小时，最多 16 小时，以完全溶解藻酸盐。使用 0.22 mm 过滤器对溶液进行灭菌。在 4°C 至 8°C 下保存长达一周。分化培养基的制备 将软骨细胞分化工具在水浴中预热至 37°C。解冻后，将剩余的软骨细胞分化工具储存在 2°C-8°C 的黑暗中以供以后使用。在这些条件下储存时，分化培养基可稳定保存长达三周。注意：对于使用少于 100 mL 体积的软骨细胞分化工具的程序，可以将培养基分配到适当的等分试样中（例如，为了与此方案一起使用，我们建议分配到 25 mL 等分试样中）。未使用的部分可以重新冷冻一次，不会损失效率；然而，不建议多次冷冻/解冻循环。为软骨细胞分化准备细胞 按照脂肪源间充质干细胞 (ATCC PCS-500-011) 的说明，使用间充质干细胞基础培养基 (ATCC PCS-500-030) 补充间充质干细胞生长试剂盒 - 低血清(ATCC PCS-500-040) 组件。根据实验设计的需要扩增细胞，但在开始软骨细胞分化之前传代不要超过四 (4) 次。注意：大约需要 10 至 15 个 70%-80% 汇合度的 T-75 烧瓶才能获得 2.7 x 107 个细胞，这足以使用下述藻酸盐封装方法接种 48 孔组织培养板的四个孔。当培养物达到 70%-80% 汇合并活跃增殖时，应收集细胞并计数。以 150 xg 离心 3-5 分钟后，弃去上清液，并将细胞沉淀（2.5 x 107 个细胞）重新悬浮在 800 µL 1.5%（w/v）藻酸盐溶液中。最终体积应约为 1.0 mL。注意：添加细胞后，海藻酸盐溶液不得稀释至低于 1.2% (w/v)。如果您的细胞较少，请调整所用准备的 1.5% 海藻酸盐溶液的体积以维持该比例。同样，如果您有更多单元格，请按比例缩放。通过上下吹打轻轻混合细胞-藻酸盐悬浮液；注意不要在溶液中引入气泡。继续步骤 1（如下）进行细胞的藻酸盐封装。细胞的藻酸盐封装：软骨形成微珠的形成 将 75 mL 的 100 mM 无菌 CaCl2 溶液转移至含有无菌搅拌棒的无菌 250 mL 烧杯中。室温下在搅拌板上的 CaCl2 溶液中创建一个温和的漏斗。用装有 27 号针头的 3 mL 注射器转移藻酸盐细胞悬浮液。将藻酸盐细胞悬浮液快速分配到 CaCl2 溶液中，形成软骨形成微珠。让软骨微珠搅拌 10 分钟以使藻酸盐固化（固化）。从搅拌板上取下烧杯，让软骨微珠沉淀在底部。将软骨形成微珠溶液转移到 50 mL 锥形管中，并连接到真空驱动的 Steriflip® 过滤装置。一旦液体被去除，立即打破真空，以防止损坏珠子。将软骨微珠重新悬浮在 2 mL 预热的软骨细胞分化工具中。无菌转移足够的软骨形成微珠以覆盖 48 孔板的四个孔的底表面（每孔约 0.5 mL）。此设置将产生约 6.75 x 106 个封装细胞/孔。让软骨形成微珠沉淀到孔底部。要去除残留的 CaCl2，请用 0.5 mL 软骨细胞分化工具更换每个孔中的介质两次，以清洗软骨形成微珠。最后一次洗涤后，向每个孔中添加 0.5 mL 软骨细胞分化工具。在更新培养基之前，将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 2-3 天。准备好更新培养基时，从存储中取出软骨细胞分化工具并将所需体积转移至无菌管中。 （对于 48 孔板中的 4 个孔，该体积为 2 mL）。将软骨细胞分化工具的等分试样在水浴中加热至 37°C。小心地取出用过的培养基，小心不要干扰或吸入软骨形成微珠。将 0.5 mL 新鲜、预热的软骨细胞分化工具添加到每个孔中。在更新培养基之前，将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 2-3 天。每 2-3 天重复步骤 12 至 16，直到细胞接触软骨细胞分化工具总共 21 天。根据实验设计，细胞可用于软骨细胞分化的任何阶段。为了确认钙积累，可以固定细胞并用阿尔新蓝（未提供）染色。
传代方法
规格 100毫升
保存说明 -20°C 或更低,-70°C 用于长期储存
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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