沙氏葡萄糖琼脂（Sabouraud Dextrose Agar, SDA）：成分、原理、配制、结果判读与应用综述

来源：武汉市灰藻生物科技有限公司　　浏览量：61　　发布时间：2026-06-26 09:29:58

引言

真菌在自然界中分布广泛，其中许多种类是植物、动物及人类的重要病原体，另一些则引起食品腐败或化妆品污染。在临床微生物学、食品检测及环境监测中，准确分离和培养真菌是诊断与研究的基础。然而，临床或环境样本中常伴有大量细菌，它们生长迅速，极易掩盖目标真菌。因此，需要一种既能促进真菌生长，又能抑制细菌干扰的选择性培养基。

沙氏葡萄糖琼脂（Sabouraud Dextrose Agar, SDA）由法国皮肤科医生 Raymond Sabouraud 于 1892 年研制，最初用于分离皮肤癣菌（dermatophytes）。经百余年的验证与改良，SDA 已成为真菌培养最经典的培养基之一，广泛应用于临床标本（如皮肤、指甲、毛发、痰液）、食品、化妆品及环境中真菌和酵母菌的分离培养。其核心原理是利用低 pH（约 5.6）和高浓度葡萄糖（40 g/L）来抑制多数细菌的生长，同时为真菌提供充足的碳源和氮源。必要时，还可添加氯霉素、庆大霉素等抗生素进一步增强抑菌效果。本文将对 SDA 的配方、作用原理、规范配制步骤、结果判读、主要应用及局限性进行系统阐述，以期为实验室工作人员提供全面、准确的技术参考。

一、培养基成分与配方

1.1 经典配方（每升蒸馏水）

组分	含量（g/L）	主要作用
葡萄糖（Dextrose）	40.0	高浓度碳源和能量来源，增加渗透压，抑制部分细菌
蛋白胨（Peptone）	10.0	提供氮源（氨基酸、多肽）、维生素和矿物质
琼脂（Agar）	15.0	凝固剂，用于制备固体培养基
最终 pH（25°C）	5.6 ± 0.2	酸性环境抑制多数细菌，利于真菌生长

注：蛋白胨通常采用动物组织（如牛骨、牛心）的胃蛋白酶或胰酶消化产物，也可使用混合蛋白胨（如细菌蛋白胨+大豆蛋白胨）。不同品牌可能略有差异，但均能满足常见真菌生长需求。

1.2 选择性添加剂（可选）

为增强对细菌的抑制效果，尤其在处理污染严重的临床或环境样本时，可在灭菌后冷却至 50°C 左右添加以下抗生素（终浓度）：

抗生素	终浓度（mg/L）	抑制范围
氯霉素（Chloramphenicol）	50	广谱抑制革兰氏阳性及阴性细菌
庆大霉素（Gentamicin）	40	主要抑制革兰氏阴性杆菌
四环素（Tetracycline）	50	广谱，但部分细菌耐药

通常优先使用氯霉素，因其对多数细菌有效且对真菌毒性低。若样本中可能含有耐氯霉素细菌，可联合使用庆大霉素。注意：含抗生素的 SDA 适用于临床标本（如痰液、粪便、皮肤刮取物），而不含抗生素的 SDA 适用于无菌环境（如食品、化妆品、空气采样）或已知低污染的样本。

1.3 与改良沙氏培养基的区别

• 沙氏葡萄糖肉汤（Sabouraud Dextrose Broth, SDB）：不含琼脂，用于液体培养。

• 沙氏麦芽糖琼脂（Sabouraud Maltose Agar）：用麦芽糖替代葡萄糖，用于某些特殊真菌（如荚膜组织胞浆菌）。

• 含抗生素的 SDA：如上所述。

二、作用原理

2.1 营养支持

• 葡萄糖（40 g/L）：远高于普通细菌培养基（如营养琼脂中葡萄糖通常为 0-2 g/L）。高浓度葡萄糖为真菌提供充裕的碳源，满足其代谢需求。此外，高渗透压环境对大多数细菌有抑制作用，但真菌（尤其是皮肤癣菌和酵母）具有较好的耐渗透压能力。

• 蛋白胨（10 g/L）：提供各种氨基酸、短肽及含氮化合物，是合成真菌细胞蛋白质和核酸的基础原料。同时，蛋白胨中还含有微量的维生素（如 B 族维生素）和矿物质，辅助真菌生长。

2.2 选择性抑制细菌

• 低 pH（5.6）：多数常见细菌（如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌）的最适生长 pH 为 7.0-7.5，在 pH 5.6 的环境中生长受到严重抑制甚至死亡。而多数致病性真菌（皮肤癣菌、念珠菌、曲霉等）能耐受甚至在酸性环境中生长更佳。

• 高浓度葡萄糖：增强渗透压，加剧对细菌的抑制。

• 抗生素（可选）：进一步清除残留的细菌，保证从污染样本中分离出纯的真菌培养物。

2.3 促进真菌生长

SDA 的营养组合（碳氮比适中）支持大多数真菌的快速生长。例如，白色念珠菌在 SDA 上 30°C 培养 24-48 小时即可形成明显菌落；皮肤癣菌（如红色毛癣菌）需 5-14 天，但仍能良好生长。

三、配制方法

3.1 材料准备

• 沙氏葡萄糖琼脂干粉（或各组分：葡萄糖、蛋白胨、琼脂）

• 蒸馏水或去离子水

• 1 M HCl 或 1 M NaOH（用于 pH 调节，干粉通常已调好）

• 高压灭菌锅

• 无菌培养皿或试管

3.2 配制步骤（以 1 L 为例）

1. 称量：称取 SDA 干粉 65 g（若自行配制：葡萄糖 40 g、蛋白胨 10 g、琼脂 15 g）。

2. 溶解：将干粉加入约 600 mL 蒸馏水中，搅拌混合。加热并不断搅拌至完全溶解。避免长时间煮沸或过度加热（煮沸 1 分钟虽可加速溶解，但可能破坏琼脂并加深颜色，建议加热至微沸即停止）。

3. pH 调节（若使用干粉则通常不需要）：待溶液冷却至 40-50°C，用 pH 计测定。若偏离 5.6±0.2，用 1 M HCl（降低）或 1 M NaOH（升高）缓慢调节。注意：灭菌后 pH 会略有下降，可预调至 5.7。

4. 定容：用蒸馏水补足至 1000 mL，混匀。

5. 灭菌：分装至适宜容器（三角瓶或培养基瓶），于 121°C 高压灭菌 15 分钟。注意：过度灭菌（时间过长或温度过高）会破坏葡萄糖，导致培养基颜色变深、pH 下降，影响促生长效果。

6. 冷却与添加抗生素（如需）：灭菌后取出，放置于水浴或室温冷却至约 50°C。若需制备含抗生素的 SDA，在此温度下无菌加入氯霉素溶液（预先用少量乙醇或水溶解），终浓度 50 mg/L，混匀。

7. 倾注平板或分装试管：在超净工作台中，将培养基均匀倾注至无菌培养皿（每皿 15-20 mL），静置凝固。也可分装至试管中制成斜面（摆斜面时注意保持斜面长度适中）。

8. 储存：凝固后的平板应密封（如使用塑料袋）并倒置于 2-8°C 冰箱中避光保存。有效期为 2-4 周。含抗生素的 SDA 保存期相对较短（2 周内使用最佳）。避免冷冻，以免琼脂破裂。

3.3 质量控制

每批新配制的 SDA 应进行无菌试验和生长性能试验：

• 无菌试验：随机取 3 个平板，于 30°C 培养 48 小时，应无菌落生长。

• 生长试验（不含抗生素的 SDA）：

o 接种白色念珠菌 ATCC 10231，30°C 培养 24-48 小时，应有良好生长（菌落 ≥ 1 mm，奶油色）。

o 接种黑曲霉 ATCC 16404，25°C 培养 3-5 天，应有典型黑色菌落。

o 接种大肠杆菌 ATCC 8739，30°C 培养 48 小时，应无生长或生长极微弱（证实选择性）。

• 含抗生素的 SDA：接种大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，应完全抑制。

四、培养条件

真菌培养的温度、时间和气体环境因菌种而异，以下为通用推荐：

真菌类别	培养温度	培养时间	气体环境
酵母菌（如念珠菌、隐球菌）	30–37°C	24–48 小时	有氧
丝状真菌（曲霉、青霉、毛癣菌等）	25–30°C	3–14 天	有氧
双相真菌（如组织胞浆菌）	25°C（菌丝相）或 37°C（酵母相）	2–4 周	有氧

注意事项：

• 培养期间应倒置平板防止冷凝水滴落。

• 皮肤癣菌生长缓慢，应至少培养 14 天方可报告阴性。

• 某些真菌需要光照促进产孢（如曲霉），可置于自然光或 12 小时光暗循环条件下。

五、结果判读与菌落形态

在标准培养条件下，SDA 上常见真菌的菌落特征如下表。注意：菌落形态受菌株、培养时间、温度及培养基批次影响，需结合显微镜检查确认。

真菌	菌落特征（25-30°C，SDA）	背面颜色
白色念珠菌 Candida albicans	奶油色至白色，光滑、湿润，有光泽，呈糊状或奶酪状；边缘整齐	淡黄色
黄曲霉 Aspergillus flavus	黄绿色至橄榄绿，粉末状（分生孢子丰富）；菌落生长迅速	淡黄色至黄褐色
黑曲霉 Aspergillus niger	初为白色，后变为黑色至深褐色，粉末状或颗粒状（“椒盐状”外观）	淡黄色
烟曲霉 Aspergillus fumigatus	蓝绿色至灰绿色，粉末状或绒状；菌落致密	淡黄色或淡褐色
红色毛癣菌 Trichophyton rubrum	白色绒状，随培养时间变红或深红色（也可形成黄色或紫色色素）；背面典型红色	红色或红褐色
须癣毛癣菌 Trichophyton mentagrophytes	白色至淡黄褐色，粉末状或颗粒状；有时呈星状放射褶	淡黄色至黄褐色
犬小孢子菌 Microsporum canis	白色至淡黄色，绒状或棉絮状；放射状沟纹	淡黄色（或淡橙色）
黏性毛孢子菌 Trichosporon asahii（原 T. mucoides）	白色至奶油色，湿润，有皱纹或脑回状；早期光滑	淡黄色
白地霉 Geotrichum candidum	白色至奶油色，扁平，干燥，有气生菌丝，呈绒毛状	淡黄色

SDA培养基

图1、典型菌落形态

六、主要用途与应用场景

6.1 临床微生物学

• 皮肤癣菌的分离：从毛发、皮肤鳞屑、指甲刮取物中分离毛癣菌、小孢子菌等。

• 系统性和机会性真菌的初筛：从血液、痰液、尿液、脑脊液等标本中分离念珠菌、曲霉、隐球菌等。

• 真菌性角膜炎：角膜刮片培养。

• 外耳道真菌病：耳拭子培养。

6.2 食品与化妆品检测

• 检测食品（如果汁、乳制品、烘焙食品）中的酵母菌和霉菌污染。

• 化妆品（如面霜、洗发水）的微生物限度检查，评估防腐剂效果。

6.3 环境监测

• 医院空气、表面及水系统中的真菌监测。

• 药厂洁净区、GMP车间的环境真菌检测。

6.4 药敏试验与菌种保藏

• 作为真菌药敏试验的基础培养基（需依据 CLSI M38 或 M27 标准使用指定 RPMI 1640 等，SDA 仅用于预培养）。

• 真菌菌株的短期保藏（2-8°C，数周至数月）。

七、局限性

1. 某些真菌生长不良：部分营养要求特殊的真菌（如 Histoplasma capsulatum 酵母相）在 SDA 上生长缓慢或不生长，需使用脑心浸液琼脂（BHI）或特殊培养基。

2. 产孢不良：对于某些丝状真菌（如某些皮肤癣菌），SDA 可能不诱导或减少分生孢子的产生，影响形态学鉴定。此时应使用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、玉米粉琼脂（CMA）或燕麦片琼脂（OA）辅助产孢。

3. 抑菌剂的双重抑制：添加的氯霉素等抗生素可能抑制部分真菌（如某些酵母、镰刀菌），在分离未知菌时建议同时使用不含抗生素的 SDA 作为对照。

4. 不耐受高渗透压的真菌：少数真菌（如某些海洋酵母）在 40 g/L 葡萄糖的高渗环境下生长受阻。

5. 不能完全抑制所有细菌：某些耐酸细菌（如乳酸菌、醋酸杆菌）仍可在 SDA 上生长，尤其是长时间培养时。此时需借助含抗生素的 SDA 或进一步纯化。

6. 不适用于厌氧菌或兼性厌氧真菌：SDA 为有氧培养，不适用于专性厌氧真菌（少数）。

7. pH 敏感性：SDA 的低 pH 对高温敏感，过度加热（如重复融化）会导致 pH 升高，降低选择性。

八、常见问题与故障排除

问题	可能原因	解决方法
平板大量细菌生长	pH 未调至 5.6；未使用抗生素；样本污染极重	重新配制并严格调 pH；使用含氯霉素的 SDA；减少接种量
真菌生长缓慢或无生长	培养温度不当；培养基储存过久失水；样本中真菌已死	核实培养温度；使用新鲜平板；同时接种阳性对照
菌落形态不典型	培养时间不足；未获得纯培养	延长培养时间；重新划线纯化
培养基颜色过深（褐色）	灭菌前过度加热或灭菌时间过长	严格控制灭菌条件；不可重复融化
平板过软或过硬	琼脂浓度不准确；灭菌时间过长破坏琼脂	准确称量；遵守 121°C 15 分钟

九、结语

沙氏葡萄糖琼脂（SDA）自 1892 年由 Sabouraud 创制以来，历经一个多世纪的实践检验，至今仍是真菌学实验室不可或缺的基础培养基。其巧妙的设计——高浓度葡萄糖与低 pH（5.6）相结合——在保证真菌营养充足的同时有效抑制了大部分竞争性细菌，再加上可选抗生素的加持，使其在临床、食品、化妆品及环境监测中展现出极高的实用价值。规范化的配制（避免过度加热、精确 pH 控制）、适宜的培养条件（温度、时间、气体）以及准确的菌落形态判读，是获得可靠结果的关键。

然而，SDA 并非万能。它在某些真菌产孢诱导、营养苛求菌培养及厌氧环境等方面存在局限。使用者应根据实际样本类型和检测目的，合理搭配其他培养基（如 PDA、CMA、BHI 琼脂）和方法（显微镜检查、分子鉴定），以充分发挥各培养基的优势。正确理解 SDA 的原理与适用范围，将极大提升真菌分离与鉴定的成功率，为临床诊断、食品安全及环境监控提供有力支持。

参考文献

https://microbenotes.com/sabouraud-dextrose-agar-sda/

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