常用染色液及试剂的配制

1.吕氏(Loeffer)美蓝染液(观察酵母菌)

A液:美蓝(methylene blue)    0.6g

95%酒精    30ml

B液:KOH    0.01g

蒸馏水    100 mL

分别配制A液和B液，配好后混合即可，用于酵母菌单染色，可长期保存。

根据需要可配制成稀释美蓝液，按1:10或1:100稀释均可。

2.齐氏(Zieh)石炭酸复红染色液

A液:碱性复红(basic fuchssin)   0.3 g

95%酒精   10mL

B液:碱性石炭酸    5g

蒸馏水    95 mL

将碱性复红用研钵研磨后逐渐加入95%乙醇，继续研磨至溶解，配成A液。将石炭酸溶解于水中配成B液。将A液和B液混合后，摇匀，过滤，装瓶，通常稀释5~10倍后使用，稀释液易变质，可用前稀释。

3.革兰氏(Gram's)染液

用此液染色因先用A结品紫液染色，再加B碘液固定，用C95%酒精处理，最后用D番红花红液复染。四种液体的配方如下:

A液:结晶紫液:

(1)结晶紫    2g

95%酒精    20 mL

(2)1%草酸铵水溶液    80mL

将(1)、(2)两液混匀静置24h后使用(此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制 )

B液:卢革氏碘液:

碘化钾    2g

碘    1g

蒸馏水    300 mL

先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后再加入碘，待碘全部溶解后，加水至300mL即成

C液:95%的乙醇溶液

D液:番红染色液

番红(safranineO)    2.5g

95%乙醇    100 mL

将番红溶于95%乙醇溶液中，配成番红乙醇溶液冰箱内保存。用时取番红乙醇溶液10mL加人40mL蒸馏水混匀即成0.5%番红染色液。

用途:以上染液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G⁺)或阴性(G^-)细，G⁺被染成蓝紫色，G^-被染成淡红色。

4.芽孢染色液

(1)孔雀绿(malachite green)染色液:

孔雀绿    5g

蒸馏水     100mL

(2)齐氏石碳酸复红染色液或0.5%番红染色液，配方同上

5.荚膜染色液

(1)结晶紫液(结晶紫饱和乙醇液5mL，加蒸馏水95mL)

(2)20%硫酸铜水溶液。

6.荚膜的背景染色

(1)黑色素水溶液:

水溶性黑素    10g

蒸馏水    100mL

40%甲醛(福尔马林)    0.5mL

将黑色素在蒸馏水煮沸5min，后加入甲醛作防腐剂，用玻璃过滤。

(2)墨汁染色液:

国产绘图墨汁    40mL

甘油    2mL

液体石炭酸    2mL

先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。

7.鞭毛染色液

A 液:

饱和钾明矾溶液(200/L)    2 mL

5%石炭酸溶液    5mL

20%丹宁酸(鞣酸)溶液    2mL

B液:

碱性品红    11g

95%酒精    100 mL

临用前取A液9mL和B液1mL混合均匀后使用。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。

8.0.1%美蓝染色液(观察酵母和放线菌)

美蓝    0.1g

蒸馏水    100 mL

将美蓝溶人蒸馏水中即可

9.乳酸石碳酸染色液(观察霉菌形态)

乳酸(相对密度1.2)    20g

石炭酸     20g

甘油(相对密度1.25)    40g

蒸馏水     40 mL

制法:石碳酸放入水中加热，慢慢加人乳酸和甘油。

10.乳酸石炭酸棉蓝染色液(观察真菌用)

石炭酸(结晶酚)    20g

乳酸(相对密度1.21)    20mL

甘油     40 mL

棉蓝     0.05 g

蒸馏水     20 mL

制法:

(1)先将石碳酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝

(2)微加热使其溶解，冷却后备用。

11.甲基红试剂

甲基红(methylread)    0.04g

95%酒精    60 mL

蒸馏水     40 mL

制法:先将甲基红溶于95%酒精中，然后加人蒸馏水即可

12.V P试剂

(1)5% α-萘酚无水乙醇溶液

a-萘酚    5g

无水乙醇    100 mL

(2)40%KOH溶液

KOH     40 g

蒸馏水     100 mL

13.吲哚试剂

对二甲基氨基苯甲醛    2g

95%乙醇     190 mL

浓盐酸     40 mL

14.格里斯(Griess)试剂

A液:

对氨基苯磺酸    0.5g

10%稀醋酸    150 mL

B液:

α-萘胺    0.1g

蒸馏水     20 mL

10%稀醋酸     150 mL

15.3%酸性乙醇溶液

浓盐酸    3ml

95%乙醇     97 mL

16.中性红指示剂

中性红     0.04g

95%乙醇     28 mL

蒸馏水     72 mL

中性红 pH6.8~8，颜色由红变黄，常用浓度为0.04%

17.溴甲酚紫指示剂

溴甲酚紫    0.04g

0.01mol/L NaOH     7.4 g

蒸馏水     92.6 mL

溴甲酚紫pH5.2~6.8，颜色由黄变紫，常用浓度为0.04%。

18.溴麝香草酚蓝指示剂

溴麝香草酚蓝    0.04g

0.01 mol/L NaOH     6.4 mL

蒸馏水     93.6mL

溴麝香草酚蓝pH6.0~7.6，颜色由黄变蓝，常用浓度为0.04%

19.二苯胺试剂

二苯胺     0.5g

浓硫酸    100 mL

蒸馏水     20mL

制法:将二苯胺溶于浓硫酸中，再将此液倒人蒸馏水中稀释即可，保存于棕色瓶中

20.1%链霉素

取1g装链霉素1瓶，用无菌注射器注人无菌水5mL溶解后，从其中取出0.5mL，加人 9.5 ml无菌水中混匀即得。

21.肝素溶液

用生理盐水将肝素分别稀释成25单位/毫升和200单位/mL，配好后，于115℃高压灭菌10 min，置4℃下备用。大约12.5单位肝素可抗凝1mL全血。

22.生理盐水

NaCl     0.9 g

蒸馏水     100 mL

23.1 mo1/L Na0H溶液

NaOH     40 g

蒸馏水     1000 mL

24.1 mol/L HCI溶液

HCI(含量为38%)    83.3mL

蒸馏水     916.7 mL

25.姬姆萨(Giemsa)染液

姬姆萨染料    0.5g

甘油     33 mL

甲醇     33 mL

将姬姆萨染料研细，后边加入甘油边继续研磨，最后加入甲醇混匀，56℃静置24h即为姬姆萨贮存液。

临用前取1m姬姆萨贮存液加入磷酸缓冲液(pH7.2)20mL，即为使用液。

参考文献

孙智杰, 刘芳. 基础微生物学实验指导. 北京理工大学出版社.

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更新日期：2025-01-10

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