GB 7300.501-2021微生物-酿酒酵母
来源：武汉市灰藻生物科技有限公司 浏览量：141 发布时间：2024-10-23 10:05:12
引言
酿酒酵母菌种鉴别方法
A.1 形态鉴别
A.1.1培养基
A.1.1.1麦芽汁液体培养基:麦芽汁加水稀释至10°Bx~15°Bx(巴林糖度计),115℃高压蒸汽灭菌15 min。
A.1.1.2 麦芽汁琼脂培养基:麦芽汁加水稀释至10°Bx~15°Bx(巴林糖度计),加2%琼脂粉,115 ℃高压蒸汽灭菌15 min。
A.1.1.3 产孢子培养基:葡萄糖0.1%,氯化钾0.18%,酵母汁0.25%,醋酸钠0.82%,琼脂2%,用蒸馏水配制,装管,115℃高压蒸汽灭菌15 min,搁置斜面。
A.1.1.4马铃薯葡萄糖琼脂培养基:去皮马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,自来水11。将马铃薯洗净,去皮,切成小块,立即放入水中,以免被氧化。煮沸30min,经纱布过滤,滤液加水至11,加入葡萄糖和琼脂,溶解后分装三角瓶或试管,115℃高压蒸汽灭菌20min。
A.1.2在麦芽汁液体培养基中的生长
28℃静置培养3天后,菌体在液体培养基中紧密沉淀于底部,培养液清亮,不形成菌膜。取少量菌体于400倍显微镜下观察,细胞呈卵圆形或圆形,单个或成双,偶尔成簇状,细胞芽殖。细胞长与宽之比为1~2,细胞大小分为大、中、小三型,大型细胞大小为(4.5 μm~10 μm)x(7.0μm~21μm),中型细胞大小为(3.5 μm~8 μm)X(5.0 μm~17.5 μm),小型细胞大小为(2.5 μm~7 μm)X(4.5 μm~11 μm)。
A.1.3 在麦芽汁琼脂培养基上的生长
28℃培养3天后,菌落大而湿润,微隆起或平坦,乳白色,表面光滑无褶皱,边缘整齐。
A.1.4在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的生长
28℃培养3天后,能产生子囊孢子,每囊有1个~4个圆形光面的子囊孢子。
A.2生理生化特性
在麦芽汁琼脂斜面上,于28℃士1℃,24h~48h培养,进行表A.1中的试验,以验证酿酒酵母生理生化特性。
A.3 分子生物学鉴定
采用核酸序列分析法对菌株rRNA基因中26SrDNAD1/D2区和转录间区ITS序列保守性进行分析。扩增菌株26SrDNADI/D2区和ITS序列,与GenBank等国际核酸序列数据库中Saccharomycescerevisiae序列进行同源性比较,序列差异小于1%,则该菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae。
酵母细胞数测定方法
B.1第一法平板法(仲裁法)
按 GB 4789.15-2016 第一法进行检测。检测时,GB4789.15-2016中5.1.1所“加人225ml,无菌稀释液”的温度为37℃~40℃。
B.2 第二法染色法
B.2.1 原理
活酵母能将进入细胞的次甲基蓝染色液立即还原脱色,不被染色,而死酵母被染成蓝色,通过显微镜观察即可计算活细胞数。
B.2.2 试剂或材料
B.2.2.1无菌生理盐水:0.85%的氯化钠溶液。
B.2.2.2 次甲基蓝染色液:将0.025g次甲基蓝,0.042g氣化钾,0.048g六水氣化钙,0.02g碳酸氢钠1.0g葡萄糖,加无菌生理盐水溶解,并定容至100m,密封,室温保存。
B.2.3仪器设备
B.2.3.1显微镜:放大倍数400以上
B.2.3.2血球计数板。
B.2.3.3血球计数板专用盖玻片
B.2.3.4分析天平:精度0.1 mg。
B.2.3.5恒温水浴:控温精度士0.5℃。
B.2.4试验步骤B.2.4.1 称取 0.1g样品,精确至0.0002g,准确加人37℃~40℃无菌生理盐水20ml,振荡使充分分散,置32℃恒温水浴中活化1h。
B.2.4.2将活化液振荡均匀,取酵母活化液0.1ml,至一试管中,加入次甲基蓝染色液0.9ml,摇匀,室温下静置染色 10 min。
B.2.4.3 将盖玻片置于血球计数板计数室上,使之紧紧盖在血球计数板上。取0.02ml,染色后的菌液(B.2.4.2)到血球计数板和盖玻片结合处,让菌液自动吸入计数室。菌液中不应有气泡,静置1min后,用显微镜观察计数。
注1:计数板通常有两种规格:一种是1个大格中有16个中格,1个中格又分25个小格,即16X25规格,用这种规格计数板,取左上、左下、右上、右下四个中格(即100个小格)进行计数。另一种是1个大格分为25个中格。一个中格分为16个小格,即25X16规格,用这种计数板,则除了左上、左下、右上、右下四个中格外,还需加中央的一个中格(即80个小格)进行计数。
注2:盖玻片放置好后不要滑动,否则细胞也会移动,滴注后计数时处于水平状态。
B.2.4.4用10X接物镜和16X接目镜找出方格后,换用40X接物镜,调整微调至视野最清晰,开始计数,当细胞处于方格线上时,计数原则:数上不数下,数左不数右。计出芽时,超过母细胞的二分之一者按细胞计,小于二分之一者忽略不计。染为蓝色的为死细胞,无色的为活细胞,只计活细胞数。
注1:在显微镜下观察酿酒酵母细胞形态为细胞卵圆形或椭圆形,大小为(5μm~7.5μm)X(7.5μm~10μm),胞内可看到明显的细胞核。
注2:对每个样品重复计数两次,取其算术平均值
B.2.5 结果计算
每克试样中活细胞数X,,以数量计,数值以个/g表示,按式(B.1)计算:
B.2.6精密度
在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的10%。
参考文献
《GB7300.501-2021 饲料添加剂 第5部分：酿酒酵母》
相关资源
名称:酿酒酵母|Saccharomyces cerevisiae
菌株编号:HZB219926
敬请关注“灰藻视界”，共筑健康未来！
— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上
灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，共创生命科学的美好未来！
更新日期：2024-10-23
#创作团队
编制人：木木