GB 7300.503-2023饲料添加剂 第5部分：微生物 屎肠球菌
来源：武汉市灰藻生物科技有限公司 浏览量：234 发布时间：2024-10-22 09:42:38
屎肠球菌菌种鉴别方法
A.1 形态鉴别
A.1.1 肠球菌选择性培养基(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂)
A.1.1.1成分
A.1.1.2 制法
将各成分加入蒸馏水中,加热不断搅拌,煮沸使琼脂完全溶解,115℃高压灭菌15min~20 min。临用时加热使培养基熔化,冷却至45℃~50℃时使用。
A.1.2 菌落选择
用接种针或接种环随机挑取5个菌落
A.1.3 菌体染色及形态检验
革兰氏染色阳性。菌体细胞呈卵圆形,大小为(0.6μm~2.0μm)X(0.6μm~2.5μm)多数成对或成短链。无芽孢，无明显英膜,通常不运动。
A.1.4 菌落形态
在肠球菌选择性培养基(胆汁七叶苷叠氮钠琼脂)上菌落生长形态特征为:带有棕紫色环的黑色或棕黑色菌落,边缘整齐、表面光滑、圆形。
A.2生理生化特征
屎肠球菌生理生化特征见表A.1
A.3分子生物学鉴定
采用核酸序列分析法对菌株rRNA基因中16SrRNA全基因序列进行分析,与GenBank等国际核酸序列数据库中模式菌株ATCC19434的16SrRNA基因序列进行同源性比较,序列差异小于1%,则判定该菌株为尿肠球菌(Enterococcusfaeciumn)。
屎肠球菌活菌计数
B.1 试剂
B.1.1 MRS培养基
B.1.1.1 成分
B.1.1.2 制法
将各成分加入蒸馏水中,加热不断搅拌,煮沸使琼脂完全溶解,115 ℃高压灭菌15 min~20 min。临用时加热使培养基熔化,冷却至45℃~50℃时使用。
B.1.2 生理盐水
B.1.2.1 成分
B.1.2.2 制法
将氯化钠加人蒸馏水中,搅拌溶解,分装,121℃高压灭菌15min。
B.2样品制备
称取25.0g样品,加入225ml,无菌生理盐水(对于包被产品,可采用厂家提供的方法进行预处理)中均质。待均匀后,再将样品用无菌溶剂按十倍稀释法制成不同浓度稀释液。取1.0mL合适浓度稀释液,注入无菌平皿,每个稀释度做两个平皿。将融化并冷却至45℃~50℃的MRS培养基,向每个培养皿中倒人15ml~20mL,摇匀并凝固,制成相应培养基的琼脂平板。36℃士1℃倒置培养 24 h~48h。空白对照至少为2个,以无菌溶剂代替同等质量的样品。
B.3菌落计数
选取B.2中适宜的稀释度、菌落在30CFU~300CFU之间的平板进行计数。计算方法和结果输出按照GB/T 13093 执行。
参考文献
《 GB 7300.503-2023饲料添加剂 第5部分：微生物 屎肠球菌》
饲料原料目录(中华人民共和国农业农村部公告)
饲料添加剂品种目录(中华人民共和国农业农村部公告)
相关资源
菌株编号:HZB906067
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更新日期：2024-10-22
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