GB 7300.502-2023饲料添加剂 第5部分：微生物 植物乳杆菌

植物乳杆菌菌种鉴别方法

A.1 形态鉴别

A.1.1、MRS 培养基

A.1.1.1成分

A.1.1.2 制法

将各成分加入蒸馏水中,加热不断搅拌,煮沸使琼脂完全溶解,115℃高压灭菌15min~20 min。临用时加热使培养基熔化,冷却至45℃~50℃时使用。

A.1.2 菌落选择

用接种针或接种环随机挑取5个菌落

A.1.3 菌体染色及形态检验

革兰氏染色阳性。菌体细胞呈圆端直杆状,通常宽为0.9μm~1.2μm,长为3.0μm~8.0μm,单个、成对或成短链。

A.1.4 菌落形态

在MRS培养基的琼脂平板上菌落生长形态特征为:白色、偶尔呈浅黄或深黄色,边缘整齐、表面光滑、圆形,直径为3.0μm ± 1.0μm。

A2生理生化特征

接种并培养24h,进行表A.1中各项试验

A.3分子生物学鉴定

采用核酸序列分析法对菌株rRNA基因中16SrRNA全基因序列进行分析,与GenBank等国际核酸序列数据库中模式菌株ATCC14917的16SrRNA基因序列进行同源性比较,序列差异小于1%,则判定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。

植物乳杆菌活菌计数

B.1 试剂

B.1.1 MRS培养基

按 A.1.1制备

B.1.2 生理盐水

B.1.2.1 成分

B.1.2.2 制法

将氯化钠加人蒸馏水中,搅拌溶解,分装,121℃高压灭菌15min。

B.2样品制备

在按照GB/T14699.1进行采样基础上,称取25.0g样品,加人225ml,无菌生理盐水(对于包被产品,可采用厂家提供的方法进行预处理)中均质。待均匀后,再将样品用无菌溶剂按十倍稀释法制成不同浓度稀释液。取1.0mL合适浓度稀释液,注入无菌平皿,每个稀释度做两个平皿。将融化并冷却至45 ℃~50℃的 MRS培养基,向每个培养皿中倒人15 mL~20ml,摇匀并凝固,制成相应培养基的琼脂平板。36℃士1℃倒置培养24h~48h。空白对照至少为2个,以无菌溶剂代替同等质量的样品。

B.3菌落计数

选取B.2中适宜的稀释度,菌落在30CFU~300CFU之间的平板进行计数。计算方法和结果输出按照GB/T13093执行。

参考文献

《GB 7300.502-2023饲料添加剂 第5部分：微生物 植物乳杆菌》

饲料原料目录(中华人民共和国农业农村部公告)

饲料添加剂品种目录(中华人民共和国农业农村部公告)

相关资源

名称:植物乳杆菌|Lactobacillus plantarum

菌株编号:HZB116525

敬请关注“灰藻视界”，共筑健康未来！
— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，共创生命科学的美好未来！

更新日期：2024-10-21

#创作团队

编制人：木木