GB/T 5750.12-2023生活饮用水标准检验方法第12部分:微生物指标-大肠埃希氏菌
来源：武汉市灰藻生物科技有限公司 浏览量：696 发布时间：2024-10-15 11:12:40
7 大肠埃希氏菌
7.1 多管发酵法
7.1.1原 理
将总大肠菌群多管发酵法在初发酵时阳性的培养物,接种在含有荧光底物的培养基上,经培养产生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase),分解荧光底物释放出荧光产物,在紫外光下产生特征性荧光的细菌,以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。
7.1.2 EC-MUG 培养基
7.1.2.1 成分
按如下成分配制:
7.1.2.2 制法
将上述成分加人纯水中,充分混匀,加热溶解,在366nm紫外灯下检查无自发荧光后分装于试管中，115℃高压蒸汽灭菌20min,最终pH为6.7~7.1。
7.1.3 仪器设备
7.1.3.1 紫外灯:6W,波长为 366 nm。
7.1.3.2培养箱。
7.1.3.3电子天平。
7.1.3.4平皿:直径9cm。
7.1.3.5无菌试管:约15 mmX160 mm。
7.1.3.6无菌吸管:1mL,10 mL。
7.1.3.7移液器:1mL。
7.1.3.8锥形瓶:1000 mL。
7.1.3.9小倒管。
7.1.3.10 接种环
7.1.3.11冰箱。
7.1.4 试验步骤
7.1.4.1 接种:用无菌接种环或无菌棉签将总大肠菌群多管发酵法在初发酵时产酸产气的试管中液体接种到EC-MUG管中。实验室生物安全要求应依据GB19489。7.1.4.2 培养:将已接种的EC-MUG管在培养箱中44.5℃士0.5℃培养24 h±2 h。
7.1.5 试验数据处理
将培养后的EC-MUG管在暗处用紫外灯照射,如果有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。
计算EC-MUG 阳性的管数,查对应的MPN表得出大肠埃希氏菌的MPN值,结果以MPN/100ml报告
7.2滤膜法
7.2.1 原理
将总大肠菌群滤膜法检测阳性的滤膜,置于含有荧光底物的培养基上培养,能产生β-葡萄糖醛酸酶,分解荧光底物释放出荧光产物,使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光,以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。
7.2.2 MUG营养琼脂培养基(NA-MUG)
7.2.2.1 成分
按如下成分配制:
7.2.2.2制 法
将上述成分加人纯水中,充分混匀,加热溶解,经121℃高压蒸汽灭菌15min,最终pH为6.6~7.0。在无菌操作条件下倾倒平板备用。倾倒好的平板可于0℃~4℃冷藏保存2周。
7.2.3 仪器设备
7.2.3.1紫外灯:6W,波长为366nm。
7.2.3.2其他仪器设备应符合5.2.3的要求。
7.2.4 试验步骤
7.2.4.1接种:在无菌操作条件下将有典型菌落生长的滤膜转移到NA-MUG平板上,细菌截留面朝上,进行培养。实验室生物安全要求应符合GB19489的要求。7.2.4.2 培养:将已接种的NA-MUG平板于36 ℃±1 ℃培养4 h。
7.2.5 试验数据处理
将培养后的NA-MUG平板在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外灯照射,如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示该菌落为大肠埃希氏菌。
记录有蓝色荧光产生的菌落数并报告,报告格式按总大肠菌群滤膜法的要求
7.3 酶底物法
7.3.1 原理
大肠埃希氏菌在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase),可分解色原底物后释放出色原体使培养基呈现颜色变化,并能产生 β葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase),分解荧光底物释放出荧光产物,使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光,以此技术来检测大肠埃希氏菌的方法
7.3.2 培养基与试剂
应符合5.3.2的要求
7.3.3仪器设备
7.3.3.1紫外灯:6W,波长为366 nm。
7.3.3.2其他仪器设备应符合5.3.3的要求。
7.3.4 试验步骤
应符合5.3.4的要求
7.3.5试验数据处理
7.3.5.1 结果判读
结果判读应符合 5.3.5.1的要求,对照表同总大肠菌群酶底物法中表5与表6。水样变为黄色同时有蓝色荧光判断为大肠埃希氏菌阳性,水样未变黄色而有荧光产生不判定为大肠埃希氏菌阳性。
7.3.5.2 定性反应
将经过24h培养颜色变成黄色的水样,在暗处用波长为366nm的紫外灯照射,如果有蓝色荧光产生判断为阳性,表示水中含有大肠埃希氏菌。水样如未产生蓝色荧光,判断为阴性。结果以大肠埃希氏菌检出或未检出报告。
7.3.5.3 10管法
7.3.5.3.1 将培养24h水样颜色变成黄色的试管,在暗处用波长为366nm的紫外灯照射,如果有蓝色荧光产生,则表示大肠埃希氏菌为阳性。
7.3.5.3.2 计算有荧光反应的试管数,对照表5查出其代表的大肠埃希氏菌MPN值。结果以MPN/100ml表示。如所有管均未产生荧光,则可报告大肠埃希氏菌未检出。
7.3.5.4 51孔定量盘法
7.3.5.4.1 将培养24h颜色变成黄色的水样的定量盘在暗处用波长为366nm的紫外灯照射,如果有蓝色荧光产生,则表示该定量盘孔穴中大肠埃希氏菌为阳性。
7.3.5.4.2计算有荧光反应的孔穴数,对照表6查出其代表的大肠埃希氏菌MPN值。结果以MPN/100ml表示。如所有孔均未产生荧光,则可报告大肠埃希氏菌未检出。
参考文献
《GB/T 5750.12-2023 生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》
相关资源
名称:大肠埃希氏菌|Escherichia coli
菌株编号:HZB196514
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更新日期：2024-10-15
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编制人：木木