实验指南 | 脑心浸液（BHI）琼脂：历史沿革、组成原理、应用实践与局限性解析
来源：武汉市灰藻生物科技有限公司 浏览量：1268 发布时间：2024-04-17 21:56:10
引言
1919年，Rosenow研制出一种出色的培养链球菌的培养基，该培养基采用添加脑组织的葡萄糖肉汤。随后Hayden对此配方进行改良，发现添加碎大理石有利于牙科病原体的生长。当前版本中，我们以牛脑浸液替代脑组织，并以磷酸二氢钠取代碳酸钙。脑心浸液（BHI）琼脂是一种营养丰富、能满足多种微生物（包括细菌、酵母和霉菌）生长需求的基础培养基。添加（5%至10%）脱纤维羊血的BHI琼脂被广泛用于分离如荚膜组织胞浆菌等二态性真菌及其它病原性真菌（如球孢子菌）。此外，还有一种含氯霉素和环己酰亚胺的选择性配方，可在抑制多种细菌和腐生真菌的同时，利于病原性真菌的分离培养。综上，BHI琼脂是一种适用于从临床和非临床样本中培养苛养性致病细菌、酵母和霉菌的固体培养基。
图1、脑心浸液（BHI）琼脂
脑心浸液（BHI）琼脂的组成成分
HM浸膏粉：12.500 克/升
BHI粉：5.000 克/升
蛋白胨：10.000 克/升
葡萄糖（右旋糖）：2.000 克/升
氯化钠：5.000 克/升
磷酸二氢钠：2.500 克/升
琼脂：15.000 克/升
pH值（在25°C时）：7.4±0.2
脑心浸液（BHI）琼脂的原理
脑心浸液已被证实对包括多种病原体在内的广泛微生物种类具有良好的培养效果，常作为添加血液或选择性试剂的新培养基配方的基础培养基。
BHI琼脂的营养成分主要来源于脑心浸液、蛋白胨和葡萄糖。
其中，蛋白胨与浸液为培养基提供碳源、氮源、维生素、氨基酸以及必需生长因子；葡萄糖则作为能源物质；氯化钠维持培养基渗透压平衡；磷酸二氢钠起缓冲作用。
向基础培养基中添加脱纤维羊血，可为较苛养的真菌类生物提供必需的生长因子。
脑心浸液（BHI）琼脂的制备与使用方法
配制：将52.0克BHI琼脂粉溶解于1000毫升蒸馏水中，加热煮沸以完全溶解。
灭菌：于15磅压力（121°C）条件下高压蒸汽灭菌15分钟。
冷却：降至45-50°C，充分搅拌后倒入已灭菌的平板中。（注：如有需要，每毫升培养基中可加入20单位青霉素和40微克链霉素，以使培养基对真菌具有选择性）
接种：实验室收到样本后尽快使用无菌接种环进行划线接种，以获取单个菌落。
培养：对于可能受污染的样本，应同时接种选择性和非选择性培养基进行真菌分离。
将平板倒置，于湿度增加的环境中，25至30°C下培养。
对于系统性真菌病原菌及需氧放线菌的分离，应分别设置两套培养基，一套于25至30°C培养，另一套于35至37°C培养。
根据临床诊断及疑似致病菌种，应酌情包含其他培养基。
观察与报告：所有培养物每周至少检查一次生长情况，且应在报告为阴性前保持培养数周。
脑心浸液（BHI）琼脂培养结果解读
在充分培养后，平板上应在划线区域显示出孤立菌落，而在高密度接种区呈现融合生长。
通过观察平板上的真菌和/或细菌菌落的颜色与形态特征。
对于所观察到的菌落，必须通过生化试验和/或显微镜检查或血清学方法进行确认。
| 微生物种类 | 生长情况 |
|---|---|
| 白色念珠菌（Candida albicans） | 茂盛生长 |
| 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus subsp. aureus） | 茂盛生长 |
| 肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae） | 茂盛生长；灰色绿色菌落 |
| 志贺氏杆菌（Shigella flexneri） | 茂盛生长 |
| 大肠杆菌（Escherichia coli） | 茂盛生长 |
| 单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes） | 生长良好至优秀 |
| 须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes） | 生长良好至优秀 |
| 脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis） | 生长良好；灰色棕色菌落 |
脑心浸液（BHI）琼脂的用途
脑心浸液（BHI）琼脂富含营养，能支持多种微生物的茂盛生长。
通过添加血液或不同抗生素，可进一步丰富其营养成分或使其具有选择性。
该培养基作为一种通用培养基，用于从临床标本中进行需氧细菌的初步分离。
通常建议添加50毫克/升氯霉素或40毫克/升链霉素，或者混合添加50毫克/升庆大霉素与50毫克/升氯霉素，并配合添加5%-10%无菌脱纤维羊血，以抑制细菌生长并分离病原性系统性真菌。
未经补充的脑心浸液（BHI）琼脂目前推荐作为通用的需氧细菌学培养基，以及从临床标本和非临床材料中初步恢复真菌和放线菌的培养基。
脑心浸液（BHI）琼脂的局限性
生长受限：由于微生物的营养需求各异，某些苛养菌可能会受到抑制或表现出生长不良。
需进一步鉴定：完成微生物的精确鉴定需进行额外的生化试验。
非选择性：BD脑心浸液（BHI）琼脂非选择性强，对于严重被正常菌群污染的样本，应同时接种于适当的选择性培养基上，防止污染菌过度生长。
特定需求：若怀疑样本中存在需血才能生长的苛养菌，应使用添加10%羊血的脑心浸液琼脂进行培养。
总结
综上所述，脑心浸液（BHI）琼脂作为一款历史悠久且不断发展的微生物培养基，凭借其丰富的营养成分、灵活的配方调整能力和广泛的应用范围，已成为微生物学研究、临床诊断及公共卫生领域的重要工具。然而，其在面对特定微生物群体、严重污染样本及精确鉴定需求时的局限性，提示使用者应结合实际情况选择合适的培养条件与配套检测方法。
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更新日期：2024-04-17