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GeneXPlus Transfection Reagent

  • 货号 : HZB391887
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ATCC ACS-4004

  • 规格 : 1.0毫升
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 GeneXPlus Transfection Reagent
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途 瞬时转染、稳定转染、基因表达、蛋白质生产、遗传操作。适用于转染骨髓 MSC (PCS-500-012)、真皮微血管内皮细胞 (PCS-110-010)、THP-1 细胞 (TIB-202)、Raw 264.7 细胞 (TIB-71) 和 SH-SY5Y细胞（CRL-2266）。可以在此处找到细胞系特定方案的完整列表。
培养条件
培养基
使用方法 最佳质粒 DNA 转染指南 应针对每种细胞类型优化反应条件，以确保成功转染。然而，以下一般建议已被证明可以使用 GeneXPlus 转染试剂实现高效转染。表 1 列出了根据培养容器尺寸推荐的起始条件。转染时的细胞接种和细胞密度。细胞应在转染前 18 至 24 小时铺板，以确保细胞在转染时活跃分裂并达到适当的细胞密度（通常为 40-80% 汇合）。 DNA 制备。质粒 DNA 必须无菌且不含苯酚和其他污染物。 GeneXPlus 试剂与 DNA 的比率。根据细胞类型的不同，DNA (μg) 与 GeneXPlus 转染试剂 (μL) 的最佳比例从 1:1 到 1:4 不等。建议以 1:3 的 DNA (μg) 与试剂 (μL) 比例作为起始点。形成条件复杂。在无血清生长培养基中制备 GeneXPlus 转染试剂和 DNA 复合物。存在抗生素和其他已知抑制剂。抗生素可以抑制转染复合物的形成，因此应排除在复合物形成步骤之外。含有聚阴离子如肝素、硫酸肝素或硫酸葡聚糖的培养基也能抑制转染。含有这些化学物质的培养基不应用于转染；然而，转染后24小时可以用含有聚阴离子的培养基替换培养基。转染后孵育时间。最佳孵育时间通常为转染后 24 至 72 小时，但会根据实验目标、所用质粒的性质和细胞倍增时间而有所不同。一些分泌蛋白可在转染后表达长达 7 天。反应大小。对于蛋白质表达，孔中充分摇动至关重要。实验表明，6 孔板中的产量可能低于摇瓶中 10 mL（或更大）反应尺寸中获得的产量，但仍能代表所选转染条件。表 1. GeneXPlus 转染试剂转染的推荐起始条件 培养容器 96 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 10 cm 培养皿 T75 烧瓶 125 mL 摇瓶 表面积 (cm2) 0.35 1.9 3.8 9.6 59 75 N/A 完全生长培养基 (mL) 0.092 0.5 1 2.5 15.5 19.7 20 稀释液（无血清培养基） (μL) 9 50 100 250 1500 1900 2000 DNA 量 (μg) 0.1 0.5 1 2.5 15 19 20 转染试剂(μL) 0.3 1.5 3 7.5 45 57 60 6 孔板每孔瞬时质粒 DNA 转染方案 注意：根据细胞培养容器的表面积调整 GeneXPlus 转染试剂、DNA 和完全生长培养基的体积，如表 1. 细胞接种 注意：为了获得更高的转染效率，建议转染时细胞的存活率 > 80%。转染前大约 18-24 小时，将细胞置于 6 孔板中每孔 2.5 mL 完全生长培养基中。转染前细胞应达到 40-80% 汇合度。对于贴壁细胞：以 2 x 105 至 6 x 105 细胞/孔的密度接种细胞。对于悬浮细胞：以 6 x 105 至 8 x 105 细胞/mL 的密度接种细胞。将细胞培养物孵育过夜。转染试剂的制备：DNA 复合物（转染前立即制备） 将 GeneXPlus 转染试剂温热至室温。使用前轻轻涡旋。将 250 μL 无血清完全生长培养基放入无菌管中。将 2.5 μg（2.5 μL 1 μg/μL 库存）质粒 DNA 添加到管中的培养基中。通过轻轻地上下吹打完全混合。将 7.5 μL GeneXPlus 转染试剂添加到稀释的 DNA 混合物中。不要让试剂接触管的侧面或底部。通过轻轻移液完全混合。短暂离心以将反应混合物收集在管底部。在室温下孵育 15-30 分钟，以便有足够的时间形成复合物。将复合物添加到细胞中 将转染复合物逐滴添加到含有完全生长培养基中的细胞的 6 孔板中（细胞接种步骤）。每次添加后轻轻旋转板。轻轻地前后摇动培养皿，使 GeneXPlus 转染试剂：DNA 复合物均匀分布。孵育 24 至 72 小时。无需用新鲜培养基更换完全生长培养基。根据需要收获细胞并进行测定。为了生成稳定的细胞转染子：转染后 24 至 48 小时，在含有适当选择抗生素（例如 G418 或潮霉素 B）的完全生长培养基中传代细胞。保持选择 1 至 2 周，以选择已经历稳定整合的细胞。脱氧核糖核酸。大规模转染：表 1 建议 20 mL 转染的起始体积（125 mL 摇瓶）。如果需要更大的体积，列出的体积可以直接按培养体积的比例放大。
传代方法
规格 1.0毫升
保存说明 -20°C 或更低
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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