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Cell Basement Membrane

  • 货号 : HZB391877
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ATCC ACS-3035

  • 规格 : 5.0毫升
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Cell Basement Membrane
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途 原代组织来源的人和小鼠类器官的三维培养 iPSC 来源的类器官的三维培养 来自各种细胞系的肿瘤球的三维培养 人肝细胞的三明治培养 人胚胎干细胞 (hESC) 和诱导多能细胞的无饲养层培养干细胞 (hiPSC) iPSC 衍生的神经祖细胞 (NPC) 和神经元的培养 通过管形成测定进行血管生成建模
培养条件
培养基
使用方法 准备和储存至关重要：细胞基底膜在储存期间始终保持冷冻状态。解冻后，始终将细胞基底膜置于冰上。不要让它升温到 4°C 以上，否则会发生过早凝胶化。程序 将细胞基底膜瓶置于冰上，在 4°C 冰箱中解冻过夜。根据浓度和应用确定每等份的适当体积。有关批次具体浓度，请参阅分析证书。使用预冷吸头将适当大小的等分试样分配到冰上预冷的管中，并立即重新冷冻。在冰上解冻等份。一旦解冻，请勿再次冷冻。解冻后，请在 7 天内使用。 A. 细胞基底膜中类器官的三维培养 将等份细胞基底膜在冰上解冻并保持在冰上。将解离的类器官（片段或单细胞）重悬于未稀释的细胞基底膜中。移液时一定要引入气泡。快速工作以确保悬架保持冷状态。在预热（37°C 细胞培养箱）组织培养处理容器中以小液滴形式分配（例如，24 孔板中每孔 50 µL）。快速工作以防止过早凝胶化。将板放入 37°C 细胞培养箱中 15-30 分钟以诱导凝胶化。添加适当体积的类器官培养基。从细胞基底膜中收获类器官 从孔中完全吸出培养基 使用细胞提升器刮擦孔表面以释放凝胶圆顶 将圆顶转移到 15 锥形管中。上下移液 20-30 次以打碎圆顶并从细胞基底膜中释放类器官。通过离心在冷 DMEM:F12 (ATCC 30-2006) 中清洗类器官。吸出上清液，留下类器官沉淀。使用类器官进行下游测定或重悬于新鲜细胞基底膜中以继续培养。 B. 人肝细胞的三明治培养解冻肝细胞并接种在 1 型胶原蛋白包被的板上。 6-24 小时后，使用补充有 0.25 mg/mL 细胞基底膜的冷肝细胞维持培养基进行完整的培养基更换。有关批次具体浓度，请参阅分析证书。例如，如果细胞基底膜的批次特定浓度为 15 mg/mL，则每 mL 肝细胞培养基添加 16 uL 细胞基底膜。将板放回培养箱。 24 小时后，使用肝细胞维持培养基（未补充细胞基底膜）进行彻底的培养基更换。 C. 通过管形成测定进行血管生成建模 将细胞基底膜在冰箱（2°C 至 8°C）中解冻，在冰中过夜。小心地上下吹打细胞基底膜，充分混合，小心不要引入气泡。不要稀释。将 150 µL/cm2 移液至组织培养容器表面。轻轻旋转容器，确保整个表面均匀覆盖。将涂层培养皿在 37°C 下放置 30 分钟。涂层容器即可使用。 D. 人胚胎干细胞 (hESC) 和诱导多能干细胞 (hiPSC) 的无饲养层培养 请参阅《ATCC 干细胞培养指南》了解更多信息。重要提示：如果温度高于 15°C，细胞基底膜将在 15 至 30 分钟内固化。始终将细胞基底膜和实验室器具（移液器吸头、血清移液器、锥形管）置于冰上，以防止基质过早胶凝。如果在涂覆培养皿时形成气泡，请使用冷冻的移液器吸头来打破气泡。对于干细胞、NPC、NPC 衍生神经元：将细胞基底膜在冰箱（2°C 至 8°C）中解冻，在冰中过夜。通过直接将细胞基底膜添加到冰上的冷 DMEM：F 12 培养基 (ATCC 30 -2006) 中，将解冻的细胞基底膜稀释至 150 µg/mL，并充分混合。立即用 2 mL 稀释的细胞基底膜涂覆每个 6 cm 培养皿。轻轻旋转培养皿，确保均匀覆盖整个培养皿。将涂层培养皿在 37°C 下放置一小时。吸出包被溶液并立即铺板细胞。涂层不会变干至关重要。如果准备好的餐具当天不使用，则不要吸出涂层溶液。用封口膜密封涂覆的培养皿，并在 2°C 至 8°C 下保存最多一周。请注意，储存的菜肴在使用前应在生物安全柜中加热至室温至少一小时。参考文献 ATCC 血管生成技术公告。阿尔比尼 A 等人。用于定量肿瘤细胞侵袭潜力的快速体外测定。癌症研究 47(12): 3239 -3245, 1987。Kubota Y 等人。层粘连蛋白和基底膜在人内皮细胞形态分化为毛细血管样结构中的作用。 J Cell Biol 107：1589-1598，1988。Ponce M 等人。层粘连蛋白 γ 1 链上内皮细胞结合位点的鉴定。 Circ Res 84:688 -694, 1999。Eisenstein M，在盘子之外思考。 Nat 方法 3:1035 -1043, 2006。Arnaoutova I 等人。基底膜上的内皮细胞管形成测定已经 20 周年了：科学和技术的发展水平。血管生成 12(3):267-274, 2009。Angel M, Yanik MF。先天免疫抑制使编码重编程蛋白的 RNA 频繁转染成为可能。公共科学图书馆一号。 5（7）：e11756，2010。
传代方法
规格 5.0毫升
保存说明 -80°C 或更低
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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