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Adipocyte Differentiation Toolkit for Adipose-Derived MSCs and Preadipocytes

  • 货号 : HZB391874
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ATCC PCS-500-050

  • 规格 :
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Adipocyte Differentiation Toolkit for Adipose-Derived MSCs and Preadipocytes
别称
形态特征
特征特性 试剂
生长特性
主要用途 用于脂肪源性间充质干细胞和前脂肪细胞的脂肪细胞分化工具包包含培养基和试剂，旨在高效诱导活跃增殖的脂肪源性间充质干细胞和前脂肪细胞中的脂肪生成，并在脂质积累过程中支持衍生脂肪细胞的成熟。该工具包由以下组件组成： 一瓶含有 1 mL 的 AD 补充剂，用于启动脂肪细胞分化 一瓶含有 5 mL 的 ADM 补充剂，用于维持脂肪细胞分化 一瓶含有 100 mL 的脂肪细胞基础培养基，用于脂肪细胞分化脂肪细胞分化的启动和维持 *用于脂肪源性 MSC 和前脂肪细胞的脂肪细胞分化工具包提供了足够的培养基和试剂，用于在以 18,000 个活细胞/cm2 的推荐密度铺板于 6 个 6 孔的 4 个孔中时，分化约 6.8 x 105 个细胞。良好的组织培养格式。
培养条件
培养基
使用方法 拆包和储存说明 检查所有容器是否有泄漏或破损。将分化工具包储存在 -20°C 的冰箱中，该冰箱不能自动除霜。补充剂解冻后请勿重新冷冻。如果到达后解冻，只要在 72 小时内添加到脂肪细胞基础培养基中，补充剂就可以在 2 至 8°C 下保存。制备完成后，两种补充培养基在 2 至 8°C 的黑暗条件下保存时可稳定保存长达三周。注意：下面提供了有关制备 (1) 含有 AD 补充剂的起始培养基和 (2) 含有 ADM 补充剂的维持培养基的说明。在继续之前，请参阅“脂肪细胞分化培养基的制备”部分。抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要，可以在补充前添加到 100 mL 瓶脂肪细胞基础培养基中。表 1 总结了添加到脂肪细胞基础培养基中的每种可选成分的推荐体积。 成分 体积 最终浓度 庆大霉素-两性霉素 B 溶液 0.1 mL 庆大霉素：10 µg/mL 两性霉素 B：0.25 µg/mL 青霉素-链霉素-两性霉素B 溶液 0.1 mL 青霉素：10 单位/mL 链霉素：10 µg/mL 两性霉素 B：25 ng/mL 酚红 0.1 mL 33 µM 准备细胞进行脂肪细胞分化 遵循脂肪来源间充质干细胞 (ATCC PCS) 生长的说明-500-011）。建议在开始脂肪细胞分化之前，细胞传代不要超过四 (4) 次。当细胞达到 70-80% 汇合时，将其以 18,000 个细胞/cm2 的密度传代到组织培养板中。根据所使用的组织培养板调整细胞数量和培养基体积。示例：对于表面积为 9.5 cm2/孔的 6 孔组织培养板，向每个含有 2 mL 补充有间充质干细胞的间充质干细胞基础培养基 (ATCC PCS-500-030) 的孔中添加总共 171,000 个活细胞细胞生长试剂盒 - 低血清 (ATCC PCS-500-040) 组件。孵育前轻轻地来回摇晃培养板，使细胞均匀分布。不要旋转。在开始脂肪细胞分化之前，将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 48 小时。脂肪细胞分化培养基制备脂肪细胞分化过程需要两种单独的培养基制备：一种用于启动，一种用于维持。这些培养基的储备溶液可以提前串联制备，如下所示：解冻分化试剂盒的所有三种成分，并在水浴中加热至 37°C。注意：加热时可能需要摇动 AD 补充剂和 ADM 补充剂，以帮助重新溶解冷冻时可能从溶液中沉淀出来的任何成分。用 70% 乙醇喷洒所有三个套件组件的外表面，以净化它们。使用无菌技术并在层流罩或生物安全柜中工作：将 15 mL 脂肪细胞基础培养基和 1 mL AD 补充剂转移至无菌 50 mL 锥形管中，每次转移使用单独的无菌移液器。这是在分化的前 96 小时内使用的脂肪细胞分化起始培养基的工作储备液。将 5 mL 的 ADM 补充剂添加到剩余 85 mL 的脂肪细胞基础培养基中。这是您的脂肪细胞分化维持培养基的工作库存。盖紧每个培养基容器并轻轻旋转内容物以确保溶液均匀。请勿用力摇晃，以免产生泡沫。给瓶子贴上标签并注明日期。每个容器的分化培养基应在 2°C 至 8°C 的黑暗条件下保存（不要冷冻）。在这些条件下储存时，分化培养基可稳定保存长达三周。脂肪细胞分化程序起始阶段将制备的脂肪源性间充质干细胞孵育（如上所述）后，小心地从孔中吸出培养基。立即向每个孔中添加 2 mL 室温 D-PBS (ATCC® 30-2200) 冲洗细胞一次，然后小心地从孔中吸出 PBS。将 2 mL 预热 (37°C) 脂肪细胞分化起始培养基添加到每个孔中，开始脂肪细胞分化过程。注意：建议您在每次饲喂前将所需体积的培养基转移至无菌管中进行预热，而不是反复重新加热整个工作库存。将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 48 小时。通过小心地从每个孔中取出一半体积的培养基 (1 mL) 并向每个孔中添加另外 2 mL 预热 (37°C) 脂肪细胞分化起始培养基来喂养细胞。重要提示：抽吸过程中请勿倾斜板。重要的是，在此步骤和后续步骤中，细胞单层不暴露于空气，以确保正在发育的脂质囊泡不会破裂。维持阶段 将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 48 小时。小心地从每个孔中取出 2 mL 介质（留下 1 mL），并用每个孔中的 2 mL 预热 (37°C) 脂肪细胞分化维持介质替换。重要提示：抽吸过程中请勿倾斜板。重要的是，在此步骤和后续步骤中，细胞单层不暴露于空气，以确保正在发育的脂质囊泡不会破裂。每 3-4 天重复步骤 6 和 7，持续 11 天，直到脂肪细胞完全成熟。 （起始阶段开始后 15 天或细胞初始铺板后 17 天将达到完全成熟。）根据实验设计，细胞可用于脂肪细胞分化的任何阶段。为了确认脂质积累，可以固定细胞并用油红 O 染色。
传代方法
规格
保存说明 -20°C 或更低,-70°C 用于长期储存
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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