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Neospora caninum Dubey et al.

  • 货号 : HZB389881
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ATCC 50977

  • 规格 :
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Neospora caninum Dubey et al.
别称 Nc-1
形态特征
特征特性 原生生物,寄生原生动物,产地:美国;宾夕法尼亚州,分离基:瘫痪的狗,宿主:维罗 (ATCC CCL-81),该菌株被精氨酸支原体污染。该生物体是一种专性细胞内寄生虫,可以感染多种哺乳动物细胞系。它在体外和体内产生速殖子和缓殖子
生长特性 35℃
主要用途 它在体外和体内产生速殖子和缓殖子。
培养条件
培养基
使用方法 细胞系维护 要从冷冻状态建立细胞培养物，请将安瓿放入 35°C 的水浴中（2-3 分钟）。将小瓶浸入刚好足以覆盖冷冻材料的位置。不要摇动小瓶。解冻后，立即无菌取出安瓿中的内容物，并接种到 T-25 组织培养瓶中的 10.0 mL 新鲜 ATCC® 30-2003 中，其中含有 10% (v/v) 热灭活胎牛血清 (HIFBS)*。使用 95% 空气、5% CO2 气体混合物对烧瓶进行脱气 10 秒。在 35°C CO2 培养箱中孵育，拧紧盖子。每周更换培养基 1-2 次。 *胎牛血清可从 ATCC 购买（目录号 30-2020；请联系 ATCC 销售人员订购）。血清暴露于 56°C 30 分钟即可热灭活。这种治疗将使补体途径的蛋白质失活。从冰箱中取出血清，并以 100 mL 等份无菌分配至无菌 125 mL 旋盖瓶中。将瓶子浸入 35°C 水浴中 5 分钟。请勿将瓶子直接从冰箱转移至 56°C。将瓶子转移到 56°C 水浴中并开始计时 30 分钟。为避免污染，请勿让浴缸中的水位接触螺旋盖的边缘。最好在瓶中的血清液位和瓶盖边缘之间留出一英寸，并将水浴注满至略高于血清液位的水位。为了确保精华液均匀受热，请每十分钟旋转瓶子。注意：一些供应商提供已热灭活的血清。转移细胞系 当细胞系形成汇合层时，除去所有培养基并用 3 mL 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)（ATCC® cat. 30-2200）替换。将烧瓶在 35°C 下孵育 25-30 分钟。除去所有 PBS，并用溶解在 Hank 平衡盐溶液中的 2 mL 0.25%（w/v）胰蛋白酶代替。轻轻地将胰蛋白酶分布在单层上，除去胰蛋白酶，并将烧瓶置于 35°C 下 10 分钟。添加 2 mL 含有 10% (v/v) HIFBS 的 ATCC® 30-2003，并通过交替将培养基吸入移液管并将内容物排出到单层上来分离仍然粘附的任何细胞。将细胞悬浮液以 0.5 mL 等分试样分配至 4 个 T-25 烧瓶中，其中含有 10 mL 新鲜 ATCC® 30-2003（含 10% (v/v) HIFBS）。使用 95% 空气、5% CO2 气体混合物对烧瓶进行脱气 10 秒。在 35°C CO2 培养箱中孵育，拧紧盖子。从冷冻状态建立新孢子虫培养物 用干冰包装的冷冻安瓿应立即解冻或储存在液氮中。如果没有液氮储存设施，冷冻安瓿可在 -70°C 或以下储存约一周。在任何情况下都不要将冷冻安瓿储存在冰箱冰柜温度（通常为 -20°C）下。在此温度下储存冷冻材料将导致培养物死亡。要解冻冷冻的安瓿，请将其放入 35°C 水浴中，使安瓿的边缘保持在水位线上方。解冻时间约为2至3分钟。请勿摇动安瓿。解冻后请勿将安瓿留在水浴中。解冻后，立即将内容物无菌转移至含有新鲜单层 ATCC® CCL-81™ 细胞和 10 mL ATCC® 30-2003（含 3% (v/v) HIFBS）的 T-25 组织培养烧瓶中。使用 95% 空气、5% CO2 气体混合物对烧瓶进行脱气 10 秒。在 35°C CO2 培养箱中孵育，拧紧盖子。
传代方法
规格
保存说明 -80°C或更低保存1周,气相液氮可长期保存
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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