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Clostridium sporogenes bacteriophage F1

  • 货号 : HZB371351
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ATCC 8074-B1

  • 规格 :
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Clostridium sporogenes bacteriophage F1
别称 F1
形态特征
特征特性 病毒,噬菌体,分离基:污水,宿主:11797 [LS 麦克隆 2002] (ATCC 8074)
生长特性 厌氧,37℃
主要用途
培养条件
培养基
使用方法 遵循下面给出的噬菌体繁殖的一般程序。使用产孢梭菌 (ATCC 8074) 作为宿主。厌氧条件：可通过使用厌氧气体室或将试管放置在连接至厌氧气体的通气套管系统下来获得用于转移的厌氧条件。可以通过以下任一方式获得培养的厌氧条件： 松开厌氧室中试管上的螺帽 松开活化厌氧气体包罐中试管上的螺帽 在试管上使用无菌丁基橡胶塞，以便厌氧气体进入保留顶部空间。噬菌体繁殖的一般程序 从冻干或解冻的冷冻小瓶中回收噬菌体： 在打开噬菌体样本之前，从冷冻库存中制备推荐宿主菌株的活跃生长的肉汤培养物。感染噬菌体的宿主应为 24 小时大。将大约 1.0 mL 推荐肉汤添加到冻干噬菌体小瓶中，将 0.5 mL 添加到液体冷冻管中。在培养箱中厌氧预热推荐培养基的平板。用 2.5 mL 融化的 0.5% 琼脂（相同培养基）覆盖表面，其中含有一滴 24 小时老宿主。软琼脂应保持在 43°C 至 45°C 直至准备倾倒。建议使用水浴。让覆盖层硬化。通过将 0.25 mL 噬菌体放入含有 2.25 mL 肉汤培养基的试管中，可以连续稀释再水化的噬菌体。根据需要重复任意数量的段落。将 100 μL 每种稀释液点在准备好的板的表面上。让其干燥。每个板上可放置三到四种稀释液。 37°C 过夜厌氧孵育后，应该可以看到裂解。在较高的稀释度下，单个噬菌斑应该是可计数的。许多菌株也可以在没有软琼脂覆盖的情况下进行滴定。将约 1.0 mL 的主机移至每个板的表面。倾斜板以确保覆盖整个表面后，吸出多余的液体。表面干燥后，像以前一样将噬菌体的各种稀释液滴到表面上。注：在板上发现噬菌体可以更容易地观察裂解情况。如果在倒入平板之前将噬菌体直接添加到软琼脂中，则可能很难看到模糊或微小的噬菌斑。耐药宿主细菌也可能掩盖菌斑形成。繁殖噬菌体：可以通过如上所述制备具有软琼脂/宿主覆盖物的平板并用大约 0.5 mL 浓缩噬菌体覆盖表面来繁殖噬菌体。或者，您可以将噬菌体直接添加到融化的琼脂/宿主中，然后倒在平板上。对于较大量，可以使用推荐的琼脂制备大尺寸 T 型烧瓶，并将约 12.0 mL 融化的软琼脂/基质倒在表面上。然后让噬菌体在硬化的表面上运行。噬菌体也可以在如上所述倾倒之前直接添加到熔化的软琼脂中。孵育24小时后，从琼脂平板表面刮去软琼脂。以约 1000 rpm 的速度离心 25 分钟，沉淀细胞碎片和琼脂。保存上清液。使上清液通过 0.22 μm Millipore 过滤器，滤液可在 4 -8°C 下短暂保存。如果噬菌体保存超过几天，则应使用或不使用冷冻保护剂进行冷冻。如果可以的话，液氮储存是长期储存的最佳方法。大多数噬菌体也可以使用与滤液各半混合的双倍浓度脱脂奶进行冷冻干燥。注：大多数噬菌体也可采用肉汤繁殖方法。除非另有说明，ATCC 使用 MH Adams 噬菌体（Interscience Publishers, Inc.，纽约，1959）中描述的 Adams 琼脂覆盖法进行常规噬菌体生产。
传代方法 ATCC 培养基 2107：改良强化梭菌 ATCC 培养基 260：含有脱纤羊血的胰蛋白酶大豆琼脂/肉汤
规格
保存说明 2°C 至 8°C
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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