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Pseudomonas sp. bacteriophage Ps-G3

  • 货号 : HZB371006
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ATCC 49780-B1

  • 规格 :
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 Pseudomonas sp. bacteriophage Ps-G3
别称 Ps-G3
形态特征
特征特性 病毒,噬菌体,产地:加拿大;萨斯喀彻温省,分离基:卓别林湖附近的盐池,宿主:假单胞菌属。 G3（ATCC 49780）
生长特性 需氧,30℃
主要用途 表征
培养条件
培养基
使用方法 仔细遵循下面给出的噬菌体繁殖程序。假单胞菌属。 G3 (ATCC 49780) 是推荐的主机。噬菌体 49780-B1 的繁殖程序。要从冻干或冷冻小瓶中回收噬菌体：在打开噬菌体样本之前，准备推荐宿主菌株的活跃生长培养物。主机年龄应为 18-24 小时。从 #1822 平板中挑选一个菌落，并在 5 mL 的 #1822 肉汤中均质化。在 30°C 下孵育，同时摇动 (170-200 rpm)，直至生长达到 OD600 0.07 至 0.1。将大约 0.5 mL 推荐的肉汤添加到冻干噬菌体小瓶中。对于冷冻小瓶，请完全解冻。用 100 µL 噬菌体感染每个 5 mL 培养物。在 30°C 下以 170-180 rpm 的速度摇动过夜。传代培养宿主并在 30°C 下孵育过夜。 16 至 18 小时后，将噬菌体培养物以 4000 g 离心 10 分钟。用 0.2 µm 或 0.45 µm PES 无菌过滤器过滤裂解液两次。滤液可在4℃保存。完全融化 0.5% #1822 琼脂。融化的软琼脂在使用前可在 55°C 下保存长达一周。要进行点滴定，请将一两个板加热至 37°C。应将软琼脂加热至 43°C 至 45°C，直至准备倾倒。建议使用水浴。用 2.5 mL 融化的 0.5% #1822 琼脂覆盖表面，其中含有 100 µL 过夜宿主培养物。让覆盖层硬化。这通常不会超过 15 到 30 分钟。噬菌体裂解物可以在 96 孔板中连续稀释四次（如果需要）。将 90 µL #1822 肉汤培养基等分到每个孔中。将 10 µL 噬菌体裂解物添加到每个孔中并混合。将 10 µL 传递到下一组的每个孔中并混合。继续到所需的段落数。将步骤 g 中每种稀释液的 2 µL 点在板上。 90 毫米培养皿最多可容纳 8 种稀释液。让斑点干燥，然后在 30°C 下孵育倒置板。这个温度对于防止宿主过度生长很重要。过夜孵育后，应该可以看到裂解。在较高的稀释度下，单个噬菌斑应该是可计数的。计算：pfu/mL = 平均噬菌斑计数 / [（稀释因子）(2x10-3mL)] 注：在平板上发现噬菌体可以更轻松地观察裂解情况。如果在倒入平板之前将噬菌体直接添加到软琼脂中，则可能很难看到模糊或微小的噬菌斑。耐药宿主细菌也可能掩盖菌斑形成。繁殖噬菌体：确定所需的总体积并将此量的肉汤放入烧瓶中。将少量过夜宿主培养物添加到烧瓶中，并在 30°C 下孵育，同时摇动，直至生长达到 OD600 0.07 至 0.1。使用以下公式用计算出的噬菌体裂解物体积进行感染。添加的噬菌体体积 (ml) = (8x108 x 总培养体积 (ml) x OD600 x MOI) / 噬菌体滴度 (PFU/ml)。在 30°C 下以 170-180 rpm 的速度摇动过夜。将噬菌体培养物以 4000 g 离心 10 分钟。用 0.2 µm 或 0.45 µm PES 无菌过滤器过滤裂解液两次。滤液可在4℃保存。裂解物应在冷藏条件下长期保持活力。它们也可以在有或没有冷冻保护剂的情况下冷冻。如果可以的话，液氮储存是长期储存的最佳方法。大多数噬菌体也可以冷冻干燥。 ATCC 使用双倍浓度脱脂牛奶，与滤液各半混合。
传代方法 ATCC Medium 1822：1M PPT 媒体
规格
保存说明 2°C 至 8°C
注意事项 更多信息请前往ATCC官网获取
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