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亨氏甲烷螺菌 ATCC 27890/Methanospirillum hungatei (JF-1, DSM 864, JCM 10133)

  • 货号 : HZB370580
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ATCC 27890,模式菌株,产甲烷菌,分离自美国的污水污泥,可用于生物工艺学研究

  • 规格 : 活化物(2-3周)
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 亨氏甲烷螺菌 ATCC 27890/Methanospirillum hungatei (JF-1, DSM 864, JCM 10133)
别称 JF-1, DSM 864, JCM 10133, NBRC 100397, OCM 16
形态特征
特征特性 古细菌, 模式菌株, BSL 1, 属于极端微生物, 产甲烷菌, 分离自美国的污水污泥, 可用于生物工艺学研究
生长特性 37℃,100% N₂(甲酸作为底物时)或80% H₂,20% CO₂
主要用途 生物技术
培养条件
培养基
使用方法 使用 70% 乙醇喷洒并点燃 Balch 管顶部进行灭菌, 甲酸可以添加至最终浓度为 100 mM 的单个管中或在分装前加入到培养基中, 如果使用甲酸作为底物, 则可以使用 100% 氮气作为气体, 如有必要, 将试管内的气体换成 80% H₂ 和 20% CO₂ 的混合气体, 如果培养基呈粉红色, 每 10.0 mL 培养基中加入 0.1 mL 1.5% 硫化钠溶液(Na₂S·9H₂O), 让培养基在室温下放置 10 至 20 分钟直至还原靛蓝变为无色, 然后再接种, 准备好 Balch 管进行接种时, 在氧气自由气体的温和流下于室温下解冻冷冻小瓶, 使用带有 22 号针头的 1.0 mL 厌氧注射器, 从小瓶中抽取细胞悬浮液并转移到液体培养基中, 将 0.1 mL 接种后的培养物涂布于非选择性平板上并在 37°C 下需氧培养, 使用 0.1 mL 接种后的培养物接种非选择性需氧液体培养基和额外的一管ATCC Medium 2487培养基, 将非选择性需氧液体培养基在 37°C 下培养, 将厌氧管在 37°C 下培养, 在 24 至 72 小时内, 应该能在ATCC Medium 2487培养基中检测到生长, 需氧平板和需氧液体培养基中不应出现生长
传代方法 培养基成分:溶液A:10ml(氯化铵:100.0 g, 六水合氯化镁:100.0 g, 二水合氯化钙:40.00 g, 将这些成分溶解于去离子水中, 用 HCl 调整 pH 至 4.0, 然后定容至一升), 溶液B:2ml(三水合磷酸二氢钾:200.0 g, 将这些成分溶解于去离子水中, 然后定容至一升), 溶液C:2ml(还原靛蓝:0.5 g, 将这些成分溶解于去离子水中, 然后定容至一升), 微量元素补充剂:10.0 ml(EDTA:0.5 g, MgSO4·7H2O:3.0 g, MnSO4·H2O:0.5 g, NaCl:1.0 g, FeSO4·7H2O:0.1 g, Co(NO3)2·6H2O:0.1 g, CaCl2 (无水):0.1 g, ZnSO4·7H2O:0.1 g, CuSO4·5H2O:0.010 g, AlK(SO4)2 (无水):0.010 g, H3BO3:0.010 g, Na2MoO4·2H2O:0.010 g, Na2SeO3 (无水):0.001 g, Na2WO4·2H2O:0.010 g, NiCl2·6H2O:0.020 g, 蒸馏水:1L); 使用方法:将 8.4 g 碳酸氢钠溶解于 976.0 mL 去离子水中(100 mM Na2HCO3), 向溶液中通入无氧气体混合物(70% N2 和 30% CO2), 在通气过程中, 加入储备溶液 A 和 B, 高初始 pH 可能导致矿物质沉淀, 随着 CO2 与碳酸氢盐缓冲体系达到平衡, pH 下降, 矿物质会重新溶解, 同时氧气被排出培养基, 依次加入2.0 g 酵母提取物, 2.0 g Trypticase 肽胨干燥成分并溶解, 让培养基通气直到变得清澈, 通常需要 30 到 60 分钟, 取决于气体流量, 清澈后的培养基 pH 应在 7.0 到 7.3 之间, 此时可以向培养基中加入溶液 C 和微量元素补充剂, 使用至少具有三个独立通气口的气体导管系统将培养基转移到培养管中, 准备好 Balch 管架, 不断地向培养基烧瓶中通气, 同时将两个导管分别放入两个连续的 Balch 管中, 使用 10 mL 吸量管将 10 mL 培养基从烧瓶转移到第一个 Balch 管中, 移除导管的同时, 迅速将丁基橡胶塞推入管口, 以最小化空气进入管内, 将导管移到第三个 Balch 管中, 并填充第二个 Balch 管, 依此类推, 所有 Balch 管填充完毕, 封口并压紧后, 即可进行高压灭菌, 高压灭菌后可能会形成沉淀, 但通过定期搅拌, 沉淀应在 48 小时内重新溶解, 详见:https://www.atcc.org/products/27890
规格 活化物(2-3周)
保存说明 ①甘油冻存管, 保存于-80℃超低温冰箱, 能够保存半年以上, ②活化物, 保存于2~8℃冰箱, 可保存2-4周
注意事项 必须保证培养基无氧, 并且需要添加还原剂, 常见的还原剂有硫化钠, 半胱氨酸, 二硫苏糖醇和柠檬酸钛, 更多信息请前往ATCC官网获取
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