如何安全高效地进行微生物实验：生物安全柜标准使用流程及维护介绍

来源：武汉市灰藻生物科技有限公司　　浏览量：8　　发布时间：2025-06-13 13:08:25

引言

生物安全柜（Biosafety Cabinet, BSC）是实验室中，用于保护操作人员、实验样品及环境，免受生物危害的关键设备。其核心功能是通过柜体内的高效空气微粒过滤器（High Efficiency Particulate Air Filter, HEPA）过滤进排气，并在柜体内产生向下气流的方式，来避免感染性生物材料污染环境与感染实验操作人员，同时防止实验操作材料间的交叉污染。《实验室生物安全手册》指出，生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。

生物安全柜类别

生物安全柜根据其原理和功能不同可分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级三大类，各类所能提供的保护不尽相同，以满足不同的生物安全实验室操作需求。Ⅰ级生物安全柜可保护实验操作者和环境，但不能保护实验样本；Ⅱ级和Ⅲ级生物安全柜可同时保护样本、实验操作者和环境，即实现所谓的"三保护"；其中Ⅱ级生物安全柜又分为Ⅱ级A1型、A2型、B1型、B2型四种类别。实际工作中，应根据自身工作风险程度，严格选择生物安全柜，确保生物安全。

表1：不同类型生物安全柜及其防护作用

以下是生物安全柜标准操作流程介绍（以Ⅱ级A2型生物安全柜为例）：

一、生物安全柜使用前准备

个人防护

穿戴实验服、手套、口罩（必要时戴护目镜或面罩）。

确保长发束起，避免松散衣物或首饰。

环境检查

确认安全柜处于正常工作状态（无报警提示）。

检查高效过滤器（HEPA）是否在有效期内，柜内无杂物堆积。

使用前后均用75%酒精擦拭台面及内壁（尤其是前窗内侧和操作区域）。

启动安全柜

开启风机，运行至少 5分钟（预净化，排出残留污染物）。

每次使用前，提前打开紫外灯，运行至少15分钟。

将安全柜门抬起至正常工作位置，注意不得高于安全柜左边的警戒线。

二、生物安全柜操作中注意事项

物品摆放原则

分区操作：

清洁区（柜体后部）：放置未使用的耗材（如培养皿、枪头）。

污染区（柜体中部）：实验操作核心区域。

废物区（柜体前部）：临时存放废弃物品（如Tip头、污染手套），如废液缸盛放。

生物安全柜是洁净实验区，不摆放任何与本次实验不相关的物品，禁止将实验样本、培养基和实验耗材等，长期存放于生物安全柜。

避免堵塞前后格栅，保持气流畅通。

操作规范

如无必要勿增实体：安全柜使用前，只携带必须用品，不多拿多放，用多少取多少（如涂布棒，吸管等耗材）；使用后，撤离个人用品，以免影响其他人使用。

轻拿轻放：动作轻柔，减少手臂频繁进出（避免气流紊乱），同时减少液体溅射，以及真菌孢子等扩散。

提前规划：一次性准备好，本次实验要用的全部用品。

安全规范优先原则：严格遵守无菌操作流程，禁止“图省事、图省时、图省力”，牺牲操作规范性。

生物污染控制

使用带盖离心管，或密封容器盛放感染性材料。

溢洒处理：立即用消毒剂（如1%次氯酸钠）覆盖，并静置20分钟后再清理。

生物安全柜

图1、生物安全柜

三、生物安全柜使用后清洁与关闭

清理废弃物

将所有污染废弃物，转入生物危害袋，密封后高压灭菌。

用75%酒精擦拭台面、内壁及移液器等工具。

关闭程序

工作结束后，须让安全柜在无任何阻碍状态下继续至少工作5min，以清除工作区域内浮尘污染，关闭生物安全柜玻璃门，打开紫外线灯消毒至少30min。

关闭前窗，再关闭电源（部分型号需长按开关键）。

记录与维护

填写使用记录（运行时间、异常情况等）。

定期进行风速检测和HEPA过滤器完整性测试（每年至少1次）。

四、紧急情况处理

断电或气流异常：立即停止操作，关闭前窗，通知管理人员。

样本泄漏：用消毒剂覆盖污染区，30分钟后清理，并报告实验室安全负责人。

生物安全柜注意事项

生物安全柜应放置在远离门窗的位置，避免门窗处的不稳定气流影响柜内层流流动路径。

禁止将生物安全柜用于物品存储，注意纸张、棉签等物品可能堵塞过滤器。使用前后需用适当消毒剂擦拭柜内工作区域。

操作台上不可堆放过多物品，以免影响柜内气流流通。

严禁在安全柜内使用易燃、易爆及腐蚀性气体。

禁止：在安全柜内进行化学挥发物实验（如强酸、放射性物质）。

Ⅱ级B2型（全排型）适用于有毒化学品，但需外接排风管道。

正确使用生物安全柜可有效降低生物风险，务必严格遵守操作规范！

生物安全柜维护及检测

为保证防护效果，对生物安全柜进行定期维护是必要的，使用单位应制定专门的作业指导书，规定日常使用维护规范，并由专人负责管理。

按照我国相关规定，必须定期检测，检测指标应包含送、排风HEPA完整性等关键项目。长期不使用时需定期开机运行保持良好状态。每次使用后必须进行去污染处理，消毒后需用清水擦拭以防腐蚀不锈钢台面，特别注意前窗防护面板不得使用酒精等消毒剂擦拭。在阶段性工作结束、更换HEPA过滤器、内部部件维护、移动位置或性能检测验证前，均应对生物安全柜进行彻底熏蒸消毒。

生物安全柜检测的主要现行标准依据包括：

①欧盟EN 12469:2000《Biotechnology-Performance Criteria for Microbiological Safety Cabinets》；

②美国NSF/ANSI 49-2002《Class II (Laminar Flow) Biosafety Cabinetry》；

③中华人民共和国医药行业标准YY 0569-2011《生物安全柜》。

检测内容涵盖物理学检测和生物学检测两个方面，按检测性质可分为首次检测和后续检测。

除年度常规检测外，遇以下情况必须安排检测：新安装后、移动后、检修后、更换HEPA后。检测项目应包括送（排）风高效过滤器完整性、下降气流流速、流入气流流速、气流模式、噪声、照度等关键指标，其中送（排）风高效过滤器完整性是最核心的检测指标，直接决定生物安全柜的防护性能。需特别注意的是，在运输、安装及实验室装修等过程中，不当操作可能导致高效过滤器滤膜受损而丧失保护功能。

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