实验指南 | 霉菌的形态观察及放线菌的制片

一、实验目的

1.观察霉菌的基本形态。

2.学习插片法、玻璃纸法制作放线菌观察玻片的方法。

二、实验原理

1.放线菌制片

和细菌的单染色一样，放线菌也可用石炭酸复红或吕氏碱性美蓝等染料着色后，在显微镜下观察其形态。

放线菌的基本结构主要包括基内菌丝、气生菌丝及孢子丝三类。通过设计各种培养和观察方法，如插片法、搭片法、玻璃纸法、印片法等，可保持放线菌自然生长状态下的形态特征。

2.霉菌制片及形态观察

霉菌菌丝较粗大，包括有隔膜菌丝和无隔膜菌丝(图1)。其细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液的优点:(1)细胞不会变形;(2)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，保持时间较长;(3)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果，便于观察。霉菌自然生长状态下的形态，常用载玻片观察，此法是接种霉菌孢子于载玻片上的适宜培养基上，培养后用显微镜观察。此外，为了得到较清晰、相对完整、自然状态下的霉菌形态还可利用玻璃纸透析培养法进行观察。此法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上用显微镜观察

图1、霉菌的有隔膜菌丝和无隔膜菌丝

霉菌的无性繁殖方式主要是无性孢子，其类型有:

(1)厚垣孢子:厚垣孢子是由部分菌丝内细胞质收缩变圆、外壁变厚而形成的孢子，圆形或者柱形(图2)

图2、厚垣孢子

(2)节孢子:节孢子由菌丝断裂形成。菌丝生长到一定阶段时出现横隔膜，然后从隔膜处断裂，产生很多单个孢子。常成串、短柱状(图3)。

(3)分生孢子:分生孢子是霉菌发育到一定阶段，在分生孢子梗的顶端细胞分割缢缩而形成的单个或成簇生的孢子，形态多样。

(4)孢囊孢子:孢囊孢子为内生孢子。霉菌发育到一定阶段，气生菌丝顶端膨大，形成圆形、椭圆形或梨形的“囊状结构”。在囊的内部聚集大量细胞核并与其周围的细胞质浓缩形成孢囊孢子，如根霉和毛霉。

图3、节孢子

三、实验材料

1.曲霉、根霉、青霉、白粉菌闭囊壳及各组同学自己培养的各类霉菌。

2.吕氏碱性美蓝染液。

吕氏碱性美蓝染液配制:

A液:美蓝(Methylene Blue)0.6g，95%酒精30mL，

B液:KOH0.01g，蒸馏水100mL

3.显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃棒、小刀、镊子等

四、实验步骤

1.放线菌制片--插片法

(1)培养基及盖玻片灭菌

(2)先插片再接种。用无菌镊子取无菌盖玻片在平板上45°角斜插入培养基内(深度约占盖玻片1/2长度)，然后接种少量以前实验大家分离得到的放线菌菌丝或孢子到盖玻片一侧的基部，接种于其中央位置约占盖玻片宽度的1/2左右。

(3)培养3~7天后镜检。

2.放线菌制片--玻璃纸法

(1)铺玻璃纸。

无菌操作，用镊子将已灭菌的玻璃纸(盖玻片大小)平铺在高氏1号培养基平板表面，用无菌玻片压平并去除气泡。

(2)接种。

无菌操作，在玻璃纸上画线接种。

(3)培养。

(4)镜检。

3.霉菌制片及观察

直接制片观察法:

(1)直接把有霉菌的培养皿置于显微镜下4倍、10倍镜观察(不要用40倍镜)。

(2)在玻片中央上滴一滴美蓝染液，用镊子从霉菌菌落的边缘处挑取少量菌丝，先放入50%乙醇中浸一下，洗去脱落孢子，置于载玻片中央，用接种针小心将菌丝分开，去掉培养基。再盖上盖玻片，将菌丝压散观察

(3)取白粉病发病的朴树叶片进行观察，其背后有白色粉状物并有黑色或黄色点状物，即为白粉菌有性生殖结构子囊果。将叶片置于显微镜下10倍镜观察，注意看其附属丝形状。感兴趣的同学可按书上的透明胶带法对霉菌进行制片观察。

五、实验结果

绘制你看到的各种霉菌的形态特征结构。

#参考文献：微生物学实验

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— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上

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更新日期：2024-05-20

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编制人：木木