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AH109酿酒酵母/Saccharomyces cerevisiae AH109

  • 货号 : HZB208803
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该菌主要用于科研,GAL4系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验

  • 规格 : 冻干粉; 活化物(1-2周)
  • 品牌 : HZBMC
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产品名称 AH109酿酒酵母/Saccharomyces cerevisiae AH109
别称 AH109
形态特征
特征特性 基因型:MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS- GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZAH109菌株来源于PJ69-2A 酵母菌株, 将lacZ报告基因引入PJ69-2A诞生了AH109, 此菌株是GAL4系统酵母双杂实验用菌株, MATa型, 可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验, Transformation marker为:trp1, leu2, 报告基因为:lacZ, HIS3, ADE2, MEL1, AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:pGBKT7和pGADT7, 质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1, 用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白, 质粒pGADT7的筛选标志为LEU, 用于表达AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白, GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域(AD), DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS, 并与之结合, 而AD可以启动UAS下游的基因进行转录, BD和AD单独存在不能激活转录, 但当二者接近时, 则呈现完整的GAL4活性, 使含有UAS的启动子下游基因转录表达, 正常条件下, BD不与AD结合, 将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合, 形成 bait融合蛋白(bait –BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD), 如果 bait和 prey发生相互作用, 就会促使 BD和 AD的相互接近, 形成完整的GAL4, 从而激活报告基因的转录, AH109有四个报告基因:lacZ, HIS3, ADE2, MEL1, 分别由三种不同的启动子 (GAL1, GAL2, MEL1)启动, 这三种启动子只有GAL4识别的17 bp核心区相同, 其余部分均不同, 大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率,
生长特性 28℃,好氧
主要用途 科研,GAL4系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验
培养条件
培养基
使用方法 ①冻干粉(安瓿管包装):用75%酒精擦拭消毒, 酒精灯灼烧顶部, 迅速滴水破裂, 用镊子敲碎, 吸取少量液培或无菌水, 溶解冻干粉, 转入新鲜的培养基, 置入适宜的培养环境, 等待菌株生长, 为保证复苏效果, 冻干粉须全部用完, 且不宜过多转接, ②活化物(斜面/平板/菌液)使用:准备新鲜培养基, 使用接种环, 接种铲或无菌吸管, 将菌种转接至新鲜培养基, 放置到适宜培养环境
传代方法 培养基成分:蛋白胨 20g, 酵母粉10g, 葡萄糖 20g, 琼脂:15.0g, pH7.2-7.4; 使用方法:称取本品65.0g于1L蒸馏水或去离子水中, 加热煮沸至完全溶解, 分装, 121℃高压灭菌15分钟, 灭菌结束后请摇匀, 备用
规格 冻干粉; 活化物(1-2周)
保存说明 ①真空冻干法, 制备为冻干粉, 保存于2-8℃冰箱, 能够保存2年以上, ②甘油冻存管, 保存于-80℃超低温冰箱, 能够保存半年以上, ③活化物, 保存于2~8℃冰箱, 可保存1-2周
注意事项 使用:①活化前将冷冻管置于低温, 干燥处, 避免菌种衰退, ②开封, 复溶等操作应无菌进行, ③如发现冷冻管盖松, 复溶液浑等异常, 请停止使用, 保存:①根据细菌特性选择合适的培养基, ②培养后尽早取出放冰箱保存, 注意不同细菌的保存温度, 如真菌等需室温保存, ③保存时记录菌种鉴定结果, 包括生长情况, 菌落特征, 染色反应等, ④菌种分为两套保存, 一套用于保存传代, 一套用于实验, 定期转种, 每3代鉴定一次
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