你一定要知道的5个微生物菌种保藏秘诀！

来源：灰藻科技　　浏览量：298　　发布时间：2024-01-13 14:28:48

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关键词：#微生物 | #菌种保藏

引言

微生物菌种是生物技术的基础和重要资源，它们在医学、农业、工业、环境和科学研究等领域有着广泛的应用和价值。为了保证微生物菌种的质量和安全，以及满足不同的使用需求，需要对微生物菌种进行有效的保藏和管理。保藏技术是指将微生物菌种在一定的条件下保存一段时间，使其保持活力和稳定性，不受外界因素的影响，方便日后的使用和传递。保藏技术的好坏直接影响到微生物菌种的利用效果和价值，因此，保藏技术是微生物菌种研究和应用的关键技术之一。

为了规范和统一微生物菌种的保藏技术，我国于2010年发布了《SN/T 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程》这一国家标准。该标准是根据国际标准《ISO 5725-2006 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results》和《ISO 9001-2008 Quality management systems - Requirements》，结合我国的实际情况，制定的一套适用于各类微生物菌种的保藏技术规范。

该标准的目的是为了提高微生物菌种的保藏质量和效率，保证微生物菌种的活力、纯度、稳定性和遗传特性，促进微生物菌种的科学研究和应用。该标准适用于微生物菌种的保藏机构和人员，以及微生物菌种的使用者和管理者。

微生物菌种保藏方法

图1、《SN/T 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程》

保藏技术的分类

根据《SN/T 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程》的规定，将保藏技术分为短期保藏、中期保藏和长期保藏三种：

1、短期保藏：指将微生物菌种在4℃～8℃的低温冰箱中保存不超过6个月的保藏技术。短期保藏适用于常用的、活力强的、稳定性好的菌种，以及正在进行研究或应用的菌种。短期保藏的方法有液体培养基保藏、琼脂培养基保藏、滤纸保藏和油层保藏等。短期保藏的优点是操作简单、成本低、菌种易于恢复和使用，缺点是菌种容易受到污染、变异和死亡，需要经常检测和更新。

2、中期保藏：指将微生物菌种在-20℃～-80℃的低温冷冻箱中保存6个月至5年的保藏技术。中期保藏适用于活力一般的、稳定性较好的菌种，以及需要定期使用或交换的菌种。中期保藏的方法有冻干保藏、冷冻保藏和冻胶保藏等。中期保藏的优点是操作相对简单、成本较低、菌种较稳定，缺点是菌种在冷冻和解冻过程中可能受到损伤，需要定期检测和更新。

3、长期保藏：指将微生物菌种在-135℃以下的超低温液氮中保存5年以上的保藏技术。长期保藏适用于活力弱的、稳定性差的、珍贵的或濒危的菌种，以及需要永久保存或备份的菌种。长期保藏的方法有液氮保藏、液氮冻干保藏和玻璃化保藏等。长期保藏的优点是菌种的活力、纯度、稳定性和遗传特性能够得到最大程度的保持，缺点是操作复杂、成本高、菌种难于恢复和使用，需要专业的设备和人员。

五种常规保藏技术

根据《SN/T 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程》，微生物菌种常规保藏技术分别为定期移植保藏法、液体石蜡保藏法、沙土管保藏法、低温冷冻保藏法和冷冻干燥保藏法。

1、定期移植保藏法：这是一种短期保藏的方法，原理是将菌种在液体或琼脂培养基中进行周期性的移植和培养，保持菌种的活力和纯度。步骤是：

（1）选择合适的菌种和培养基，进行菌种的预培养和增殖；

（2）将菌种接种到液体或琼脂培养基中，放入4℃～8℃的冰箱中保存；

（3）每隔一定的时间（一般为1～4周），将菌种从冰箱中取出，进行移植和培养，然后再放回冰箱中保存；

（4）在每次移植和培养前后，对菌种进行检测和记录，确认菌种的活力、纯度、稳定性和遗传特性。

优点是操作简单、成本低、菌种易于恢复和使用，缺点是菌种容易受到污染、变异和死亡，需要经常检测和更新。

2、液体石蜡保藏法：这是一种短期保藏的方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入液体石蜡，形成一层油膜，隔绝空气和水分，保持菌种的活力和纯度。步骤是：

（1）选择合适的菌种和培养基，进行菌种的预培养和增殖；

（2）将菌种接种到液体培养基中，培养至适当的生长阶段；

（3）在培养管的口部加入液体石蜡，形成一层油膜，覆盖菌液，封闭培养管；

（4）将培养管放入4℃～8℃的冰箱中保存；

（5）在需要使用时，用无菌针头穿过油膜，取出菌液，进行恢复和培养。

优点是操作方便、成本低、菌种较稳定，缺点是菌种的活力和纯度可能下降，需要定期检测和更新。

3、沙土管保藏法：这是一种中期保藏的方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入含有沙土的玻璃管中，使菌种附着在沙土颗粒上，然后冷冻保存，保持菌种的活力和纯度。步骤是：

（1）选择合适的菌种和培养基，进行菌种的预培养和增殖；

（2）将菌种接种到液体培养基中，培养至适当的生长阶段；

（3）在无菌条件下，将含有沙土的玻璃管用火焰灼烧，使沙土干燥和灭菌；

（4）用无菌针头或吸管，将菌液滴加到沙土管中，使菌液均匀地分布在沙土颗粒上，每管约加0.5～1ml的菌液；

（5）将沙土管放入-20℃～-80℃的冷冻箱中保存；

（6）在需要使用时，用无菌针头或吸管，从沙土管中取出少量的沙土，加入液体培养基中，进行恢复和培养。

优点是操作简单、成本低、菌种较稳定，缺点是菌种的活力和纯度可能下降，需要定期检测和更新。

4、低温冷冻保藏法：这是一种中期保藏的方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入适量的冷冻保护剂，如蔗糖、甘油、牛血清等，然后快速冷冻至-20℃～-80℃，保持菌种的活力和纯度。步骤是：

（1）选择合适的菌种和培养基，进行菌种的预培养和增殖；

（2）将菌种接种到液体培养基中，培养至适当的生长阶段；

（3）在无菌条件下，将菌液与冷冻保护剂按一定的比例混合，制成冷冻液，每管约装1～2ml的冷冻液；

（4）将冷冻液装入无菌的塑料管或玻璃管中，封闭好管口，贴上标签；

（5）将冷冻管放入-20℃～-80℃的冷冻箱中保存；

（6）在需要使用时，将冷冻管从冷冻箱中取出，迅速放入37℃的水浴中解冻，然后将冷冻液加入液体培养基中，进行恢复和培养。

优点是操作相对简单、成本较低、菌种较稳定，缺点是菌种在冷冻和解冻过程中可能受到损伤，需要定期检测和更新。

5、冷冻干燥保藏法：这是一种中期保藏的方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入适量的冻干保护剂，如蔗糖、牛血清、明胶等，然后在真空条件下进行冷冻干燥，使菌种的水分被亚冰升华，形成干燥的菌粉，保持菌种的活力和纯度。步骤是：

（1）选择合适的菌种和培养基，进行菌种的预培养和增殖；

（2）将菌种接种到液体培养基中，培养至适当的生长阶段；

（3）在无菌条件下，将菌液与冻干保护剂按一定的比例混合，制成冻干液，每管约装1～2ml的冻干液；

（4）将冻干液装入无菌的玻璃管中，封闭好管口，贴上标签；

（5）将冻干管放入冷冻干燥机中，按照设定的程序进行冷冻干燥，一般需要几个小时至几天的时间，直到菌液完全干燥，形成干燥的菌粉；

（6）将冻干管从冷冻干燥机中取出，放入密封的容器中，保存于干燥、避光、常温的环境中；

（7）在需要使用时，将冻干管从容器中取出，打开管口，加入适量的液体培养基，使菌粉溶解，然后将冻干液加入液体培养基中，进行恢复和培养。

优点是菌种的活力、纯度、稳定性和遗传特性能够得到较好的保持，缺点是操作复杂、成本高、菌种难于恢复和使用，需要专业的设备和人员。

表1、微生物菌种保藏方法优缺点汇总

方法	原理	优点	缺点
定期移植保藏法	将菌种在液体或琼脂培养基中进行周期性的移植和培养，保持菌种的活力和纯度。	操作简单、成本低、菌种易于恢复和使用	菌种容易受到污染、变异和死亡，需要经常检测和更新
液体石蜡保藏法	将菌种在液体培养基中培养后，加入液体石蜡，形成一层油膜，隔绝空气和水分，保持菌种的活力和纯度。	操作方便、成本低、菌种较稳定	菌种的活力和纯度可能下降，需要定期检测和更新
沙土管保藏法	将菌种在液体培养基中培养后，加入含有沙土的玻璃管中，使菌种附着在沙土颗粒上，然后冷冻保存，保持菌种的活力和纯度。	操作简单、成本低、菌种较稳定	菌种的活力和纯度可能下降，需要定期检测和更新
低温冷冻保藏法	将菌种在液体培养基中培养后，加入适量的冷冻保护剂，如蔗糖、甘油、牛血清等，然后快速冷冻至-20℃～-80℃，保持菌种的活力和纯度。	操作相对简单、成本较低、菌种较稳定	菌种在冷冻和解冻过程中可能受到损伤，需要定期检测和更新
冷冻干燥保藏法	将菌种在液体培养基中培养后，加入适量的冻干保护剂，如蔗糖、牛血清、明胶等，然后在真空条件下进行冷冻干燥，使菌种的水分被亚冰升华，形成干燥的菌粉，保持菌种的活力和纯度。	菌种的活力、纯度、稳定性和遗传特性能够得到较好的保持	缺点是操作复杂、成本高、菌种难于恢复和使用，需要专业的设备和人员

总结

保藏微生物菌种的目的是为了保证菌种的质量和安全，以及满足不同的使用需求。保藏技术的选择和实施需要根据菌种的类型、特性、用途和期限等因素进行。无论是哪种保藏技术，都需要遵循以下的操作步骤：菌种的选择、培养、处理、封装、标识、存储、检测和管理。同时，都需要对保藏技术进行评价和改进，提高保藏技术的水平和水准，保证保藏菌种的活力、纯度、稳定性和遗传特性，促进保藏菌种的科学研究和应用。