分子类 | 质粒、载体构建服务
来源：灰藻科技 浏览量：533 发布时间：2024-01-13 14:29:31
关键词：#技术服务 | #质粒 | #载体构建
质粒、载体构建服务简介
质粒是一种环状的DNA分子，具有自主复制能力，可以在细菌、酵母菌等生物中存在和增殖，且携带多种功能元件，如抗性标记、启动子、多克隆位点、筛选报告基因等，方便对目的基因的选择、表达和检测。质粒、载体构建的作用是将目的基因与合适的载体连接起来，形成重组DNA分子，从而实现目的基因在宿主细胞中的表达或功能研究，它可以用于基因克隆、基因表达、基因敲除、基因编辑、基因治疗等多种领域。灰藻生物是一个专业的微生物资源鉴定保藏平台，涵盖了各种微生物品类，包括工业/农业/林业/医学/兽医/药用菌种、人类/动物/植物细胞、质粒/感受态/带菌质粒等。灰藻实验中心拥有一支经验丰富的分子生物学实验技术队伍，可根据您的实验要求为您完成各种载体的构建。
图1、质粒、载体构建
载体构建流程
1、目的DNA片段和载体的制备：利用PCR技术，用一对特异性的引物，从含有目的基因的DNA模板中扩增出目的DNA片段。引物的两端要加上与载体上的酶切位点相对应的序列，以便于后续的连接；
2、目的DNA片段和载体的连接：将目的DNA片段和载体连接起来，形成重组DNA分子；
3、连接产物的转化：将连接后的重组DNA分子导入到宿主细胞中，实现重组DNA分子的复制和表达；
4、克隆筛选：从转化后的细胞中筛选出含有重组DNA分子的细胞，即重组克隆；
5、测序验证及结果交付：进一步验证重组DNA分子的准确性，以及将重组DNA分子的信息和材料交付给客户。
服务内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
表1、载体构建服务交货周期
| 载体构建服务 | 交货周期（工作日） |
|---|---|
| <1000bp | 6~10 |
| 1000~2000bp | 6~10 |
| 2000~3000bp | 6~10 |
| 3000~4000bp | 10~13 |
| 4000~5000bp | 11~15 |
| 5000~6000bp | 13~18 |
| 6000~7000bp | 15~20 |
| 7000~8000bp | 15~20 |
| 8000~9000bp | 15~20 |
| 9000~10000bp | 20~25 |
| >10000bp | 商议 |
表2、不同表达载体之间的区别
| 特点 | 大肠杆菌 | 酵母 | 昆虫细胞 | 哺乳动物细胞 |
|---|---|---|---|---|
| 生产周期 | 2~4周 | ~6周 | ~12周 | 7~9周 |
| 价格 | + | ++ | +++ | +++ |
| 表达水平 | 高（>50%） | 低~高（>10%） | 低~高（>20%） | 低~高（>30%） |
| 优势 | 快速，表达量高，易于放大高密度培养 | 大部分蛋白都能进行折叠和翻译后修饰，分泌可溶表达，易于放大高密度培养 | 大部分蛋白都能进行折叠和翻译后修饰，很好表达胞内蛋白、膜蛋白和分泌蛋白 | 所有蛋白都能进行折叠和真实的翻译后修饰，很好表达膜蛋白和分泌蛋白 |
| 缺陷 | 折叠不完全易于形成包涵体，无翻译后修饰 | 不完全正确折叠，与哺乳动物糖基化修饰存在差异 | 正确折叠，价格贵，难以放大 | 正确折叠，价格贵 |
| 规模化生产 | +++ | ++ | ++ | ++ |
| 翻译后修饰磷酸化 | 无 | 有 | 有 | 有 |
| 翻译后修饰糖基化 | 无 | 有，易过度糖基化修饰 | 有 | 有 |
| 翻译后修饰乙酰化 | 无 | 有 | 有 | 有 |
| 翻译后修饰酰胺化 | 无 | 无 | 无 | 有 |
| 翻译后修饰γ-羧基 | 无 | 有 | 有 | 有 |
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因敲除等；
3、载体元件替换和改造；
4、过表达载体构建。
注意事项
1、客户提供模板的完整序列，包括目的DNA序列和载体序列，酶切位点、模板质粒、目的质粒的名称、抗性等信息；
2、客户提供定点突变的具体要求，以及突变后的目的序列；
3、建议客户提供含有目的基因的质粒作为模板；
4、其他需求或疑问请联系客服。
交付内容
1、约4ug质粒DNA冻干粉；
2、1支含有重组质粒的穿刺菌；
3、测序图谱（电子版）；
4、COA文件（电子版）；
5、基因序列比对文件（电子版）。
灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，共创生命科学的美好未来！
更新日期：2023-12-06